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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么我的聚丙烯酰胺染色条带总是很暗
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lvsecaihong

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么我的聚丙烯酰胺染色条带总是很暗 已有2人参与

最近做聚丙烯酰胺凝胶染色后，条带总是很暗，即便是胶颜色也不深。我染色的步骤是这样的：
胶跑好之后，先用水冲洗一遍，然后一版胶用0.1g/100ml的硝酸银染色，摇床摇15-20min，然后冲洗3遍，加1.5g/100ml的NaOH溶液，摇3min，加2/3瓶盖的甲醛再摇7min，冲洗一遍。不知道为什么染的总是很浅，特别是条带。跑胶时加样都已经加到10微升了，跑PCR时，DNA浓度100ng每微升左右，跑琼脂糖凝胶的条带比较亮，但不如Maker的条带亮，PCR体系是上下游引物各1微升，10*buffer2微升，dNTP2微升，模板1微升，rTaq酶0.2微升，水12.8微升。片段300左右，PCR程序95度5min，（94度30s，Tm30s，72度30s，这三步循环35次）72度10min。望大神指导
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奋斗中的小虫
1楼 2015-05-17 12:18:46
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvsecaihong: 金币+5 2015-05-17 15:19:59
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-18 12:54:24
染色之后，加0.02g硼砂/100ml与你的NaOH一起溶解，再直接加甲醛。试试吧。
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2楼2015-05-17 12:49:36
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lvsecaihong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-17 12:49:36
染色之后，加0.02g硼砂/100ml与你的NaOH一起溶解，再直接加甲醛。试试吧。

这次试试
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奋斗中的小虫
3楼2015-05-17 15:19:42
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-18 12:54:35
本帖内容被屏蔽
4楼2015-05-18 10:56:31
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