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杜仲谷

木虫 (职业作家)

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[求助] PCR产品变性聚丙烯酰胺凝胶电泳难题已有2人参与

6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴酚蓝的位置跑到那就不往下跑了，被压缩成了一条线，什么原因呢？请大家帮忙看一下，谢谢了！
补充；PCR产品约150bp ，溴酚蓝每次到那就不跑了，并且会被压缩。聚丙烯酰胺浓度为6%，尿素浓度为6mol／L, 电泳时候电压150V，电泳1小时20分钟，胶的长为20Cm。电场强度为7.5ｖ/Cm。

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从事分生的药学生

1楼 2015-05-05 14:03:24

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loading buffer的配方为：
98%的去离子甲酰胺4.9mL
0.5moI／L 的EDTA（PH8.0）0.1ml
溴酚蓝固体0.0125g
二甲苯青FF0.0125g

最终配成：
溴酚蓝浓度约为0.25 %
二甲苯青FF浓度约为0.25%
有论坛指出是溴酚蓝和二甲苯青的问题，请问是这样吗？
我的溴酚蓝和二甲苯青固体确实是很老很久了，配好以后也没有用滤膜过滤
请问是这个原因吗？