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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产品变性聚丙烯酰胺凝胶电泳难题
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

[求助] PCR产品变性聚丙烯酰胺凝胶电泳难题 已有2人参与


6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴酚蓝的位置跑到那就不往下跑了，被压缩成了一条线，什么原因呢？请大家帮忙看一下，谢谢了！
补充；PCR产品约150bp ，溴酚蓝每次到那就不跑了，并且会被压缩。聚丙烯酰胺浓度为6%，尿素浓度为6mol／L, 电泳时候电压150V，电泳1小时20分钟，胶的长为20Cm。电场强度为7.5ｖ/Cm。
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从事分生的药学生
1楼 2015-05-05 14:03:24
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
loading buffer的配方为：
98%的去离子甲酰胺4.9mL
0.5moI／L 的EDTA（PH8.0）0.1ml
溴酚蓝固体0.0125g
二甲苯青FF0.0125g

最终配成：
溴酚蓝浓度约为0.25 %
二甲苯青FF浓度约为0.25%
有论坛指出是溴酚蓝和二甲苯青的问题，请问是这样吗？
我的溴酚蓝和二甲苯青固体确实是很老很久了，配好以后也没有用滤膜过滤
请问是这个原因吗？
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从事分生的药学生
2楼2015-05-05 14:43:27
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晞朔

金虫 (正式写手)

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感谢参与，应助指数 +1
杜仲谷: 金币+1 2015-05-06 11:45:03
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:10:07
对你的目的条带有影响吗？你可以染色一下看看啊
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3楼2015-05-05 15:34:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杜仲谷: 金币+1, ★有帮助 2015-05-06 11:45:18
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-06 13:10:14
为什么不用琼脂糖凝胶电泳跑胶。。。。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-05 15:56:28
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-05 15:34:46
对你的目的条带有影响吗？你可以染色一下看看啊

谢谢您的回复。
染色以后，原本150bp的PCR产物，竟然也跑到了这条“压缩带”。这说明似乎是什么原因阻碍了溴酚蓝带继续前进，到后续的条带仍然在动。

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从事分生的药学生
5楼2015-05-06 06:32:29
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-05-05 15:56:28
为什么不用琼脂糖凝胶电泳跑胶。。。。

也 谢谢您的回复，因为琼脂糖的分辨率还达不到区分仅有3，4个碱基差异的能力。

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从事分生的药学生
6楼2015-05-06 06:33:52
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