| 查看: 4059 | 回复: 41 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
黄xia金虫 (小有名气)
|
[交流]
蛋白纯化问题，希望大家给我支支招，成分感谢 已有8人参与
|
||
| 我的蛋白70多KD，上清表达，表达量还可以，在C端加了6His标签，用生工的Ni柱填料挂柱纯化，洗脱后，洗脱液中无目的蛋白，只有杂蛋白，目的蛋白在流穿液当中，说明没挂上，（平衡缓冲液pH8.0，蛋白的等电点4.6左右，上样流速尝试过0.4和0.5ml/min），由于没挂上，打算用切非变性胶的方式纯化，来做后续实验，但将切下的胶电透浓缩后，跑SDS-PAGE分析，有很多杂带，目的条带的量也少，与杂带量差不多，在切的过程中，有时候还切不到自己的目的蛋白，怎么办呀，我已经就纯化蛋白这个问题做了很久了，还没啥进展，希望各位有经验的亲给我一些建议，谢谢谢谢........无数个谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有90人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 小白求助纯化酶经验
已经有39人回复
- 一个有关用液相色谱分离纯化的问题
已经有21人回复
- 蛋白酶解实验，做底物浓度因素时，关于加酶的问题？
已经有7人回复
- 请教一个农药有效成分含量测定的问题，谢谢！
已经有4人回复
- 求助:癌细胞糖蛋白的提取？
已经有3人回复
- 肝脏匀浆提蛋白遇到问题，求助！！
已经有4人回复
- 毕赤酵母表达时的杂蛋白问题
已经有16人回复
- 黄芩中主要化学成分的紫外吸收波谱
已经有5人回复
- BSA做考马斯亮蓝标准曲线的问题
已经有14人回复
- 胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。
已经有27人回复
- 急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！
已经有11人回复
- 抗血清的纯化方法
已经有10人回复
- 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
已经有16人回复
- 蛋白杂质的去除
已经有19人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【求助】复方中三七有效成分（皂苷类）的提取分离纯化方法
已经有9人回复
liuderong
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 310 (大学生)
- 金币: 8202.1
- 红花: 31
- 帖子: 582
- 在线: 142.1小时
- 虫号: 1882145
- 注册: 2012-07-07
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2015-05-10 12:00:10
★ ★ ★ ★ ★
黄xia: 金币+5, 谢谢 2015-05-10 11:03:13
silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2016-01-12 15:37:16
黄xia: 金币+5, 谢谢 2015-05-10 11:03:13
silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2016-01-12 15:37:16
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-05-09 22:49:39
3楼2015-05-09 23:41:20
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:54:42
黄xia: 金币+5, ★★★很有帮助, 您好，由于看到蛋白没挂上，所以心情受到重创就完全忘了拍照，在配平衡缓冲液的时候的确没有加任何咪唑(50mMNaH2PO4·2H2O,300mMNaCl,NaOH调pH至8.0)，您提醒我了，我配20mMTris-HCl 时用了HCl和NaCl调pH值，难道是NaCl把蛋白沉淀掉了？我没考虑过，也不太懂，柱子是没问题，因为其他人用那柱子能挂上，样品自身是否聚合我不知道，不过谢谢你的建议，我会考虑加变性剂试试，也检测一下histag，真得非常感谢 2015-05-11 09:05:52
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:54:42
黄xia: 金币+5, ★★★很有帮助, 您好，由于看到蛋白没挂上，所以心情受到重创就完全忘了拍照，在配平衡缓冲液的时候的确没有加任何咪唑(50mMNaH2PO4·2H2O,300mMNaCl,NaOH调pH至8.0)，您提醒我了，我配20mMTris-HCl 时用了HCl和NaCl调pH值，难道是NaCl把蛋白沉淀掉了？我没考虑过，也不太懂，柱子是没问题，因为其他人用那柱子能挂上，样品自身是否聚合我不知道，不过谢谢你的建议，我会考虑加变性剂试试，也检测一下histag，真得非常感谢 2015-05-11 09:05:52
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2015-05-10 19:13:25
28