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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

[求助] 一个有关用液相色谱分离纯化的问题 已有6人参与

用液相跑某一个样品,发现杂质峰比较多,欲将主峰物质进一步分离纯化,收集相应峰馏分。用普通的分析检测型的HPLC可以做到吗?还是用制备型色谱?我们导师的意见是前者,只要收集到一点点就可以,然后可以做定性分析...可我查文献里说都是用制备型色谱分离...这让我感到很恼火,希望懂色谱的高手指导一下,多谢
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zl781202

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by Stefanie旭 at 2014-11-10 14:59:51
您能告诉我具体的收集过程吗?我对这种分离方法不了解,谢谢了...

你是指怎么收集的?这个很简单,只要你需要的成分峰在液相色谱上能够分离,就能够收集到纯度较高的组分。
如果你需要的组分峰前后都很干净,找个几毫升的样品瓶,在它刚出峰就可以在废液排出口进行收集了,出峰完稍微过个几秒钟就停止收集;如果组分峰前或后有个较近的杂质峰,最好估算下检测器出口到废液排放口那段管路的大概体积,根据流速计算组分从检测器出口到废液排放口所需的时间,收集时注意减去和加上那段管路的时间就行了,因为组分在检测器刚出峰时,在废液出口的还是组分前面的东西,还没流到出口。
多收集几次,将收集到的减压蒸馏、浓缩再稍微稀释进液相看纯度是否够,够的保留,不够的再纯化,直到纯度OK

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精益求精
19楼2014-11-11 10:53:18
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dongbangwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要纯化,要有足够的供试品,当然最好是制备液相,进样量大;如果是普通分析型液相,也可以,但是一般浓度很小,进样量最多也就是150ul(还是自动进样器)手动进样也就是20ul的定量环,所以还不知道要收集多少次呢
浪费时间
弟子入则孝,出则弟,谨而信,泛爱众,而亲仁,行有余力,则以学文。
3楼2014-11-09 14:21:32
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ypng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
固定条件,出峰时间前一点收集就可以,但是不知道得收集多少次,这种的效率太低,还不如自己填柱,收集馏分检测浓度呢
7楼2014-11-09 21:33:01
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星辰大海8161

铜虫 (正式写手)

手残脑亦残

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实要我说,比如一般分析HPLC,你跑一个样要15分钟,有馏分收集器的情况下,我宁愿用分析HPLC跑个10针,8针,也不愿去搞制备色谱,制备色谱流速一般在20 mL/min 上下5 mL/min,分分钟玩脱4L的试剂和水,外加额外的冲洗机器,准备特别的收集瓶,我宁愿在分析色谱上玩,只要收集一点点做定性分析就要上制备色谱的同学,实在是精力旺盛啊。
一杯子的温暖,一辈子的伴!
9楼2014-11-09 22:16:24
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ypng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有一个问题,液相一个梯度条件下的主峰不见得是单一物质,那你的红外光谱、紫外吸收都是没有意义的,除非你知道你要的物质的性质
10楼2014-11-09 22:32:35
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普通回帖

klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Stefanie旭: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-11-10 09:25:54
分析型的的确也可以,但是要提高进样量(保证分离度的前提),同时要重复多次才可以达到制备的效果,文献只是参考,要根据实际应用灵活把握;制备的话效率高,可能一次分离就足够你做定性分析了。
归零
2楼2014-11-09 10:52:49
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-11-09 10:52:49
分析型的的确也可以,但是要提高进样量(保证分离度的前提),同时要重复多次才可以达到制备的效果,文献只是参考,要根据实际应用灵活把握;制备的话效率高,可能一次分离就足够你做定性分析了。

嗯,对这方面实在了解不多。能具体说一下分析型色谱怎么才能比较准确的收集到对应峰的样品吗?
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4楼2014-11-09 17:51:17
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongbangwang at 2014-11-09 14:21:32
要纯化,要有足够的供试品,当然最好是制备液相,进样量大;如果是普通分析型液相,也可以,但是一般浓度很小,进样量最多也就是150ul(还是自动进样器)手动进样也就是20ul的定量环,所以还不知道要收集多少次呢
...

对对对,进样量只有50微升,过完柱子冲出来的液体只有那么一丁点,追问一下,能具体说一说怎么收集对应峰的液体呢?
我们都是宇宙中独一无二的个体,真正意识到这一点,那自卑便从人世间消失了
5楼2014-11-09 17:53:23
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Stefanie旭 at 2014-11-09 17:51:17
嗯,对这方面实在了解不多。能具体说一下分析型色谱怎么才能比较准确的收集到对应峰的样品吗?...

用检测器出口金属管直接接液体就可以了,看到出峰就接就行了。
归零
6楼2014-11-09 19:17:56
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forget8013

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
肯定是制备好点,考虑固相萃取么,分析物与杂质性质差距大的话可以考虑

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-11-09 22:03:23
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