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malele0208

金虫 (小有名气)

[求助] 凝胶过滤色谱与高效液相色谱的区别,这两个色谱在分离纯化多肽时有何优缺点?

凝胶过滤色谱与高效液相色谱的区别
这两个色谱在分离纯化多肽时有何优缺点?
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶过滤是通过分子量大小来进行分离的,跟HPLC用的柱子不一样,好像应该先过凝胶柱然后再上液相吧,我也是新手,最近也在分离纯化多肽,可以一起讨论哇
2楼2013-04-02 09:10:50
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huhyyong

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

设备运作原理差不多,柱子和填料不填,液相相对精度压力之类的大些,分离方式也都分好多种,分子筛、离子交换、极性大小
16楼2013-11-09 14:27:57
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普通回帖

malele0208

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dandan_cece at 2013-04-02 09:10:50
凝胶过滤是通过分子量大小来进行分离的,跟HPLC用的柱子不一样,好像应该先过凝胶柱然后再上液相吧,我也是新手,最近也在分离纯化多肽,可以一起讨论哇

如果凝胶是通过分子量进行分离,那超滤可以代替凝胶了吧,我超滤后直接进行液相也行了呗,是这个意思吗?
3楼2013-04-06 09:41:40
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

树树8013: 应助指数+1, 欢迎继续关注食品板块 2013-04-15 21:49:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by malele0208 at 2013-04-06 09:41:40
如果凝胶是通过分子量进行分离,那超滤可以代替凝胶了吧,我超滤后直接进行液相也行了呗,是这个意思吗?...

凝胶比超滤分的更细吧,超滤是初分,我也用超滤分了,然后上离子交换柱,不过目前离子交换柱分的效果不太理想,还在摸索阶段,如果超滤后直接进行液相,可能杂质会比较多吧,我也不是很懂啦
4楼2013-04-07 12:46:27
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malele0208

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dandan_cece at 2013-04-07 12:46:27
凝胶比超滤分的更细吧,超滤是初分,我也用超滤分了,然后上离子交换柱,不过目前离子交换柱分的效果不太理想,还在摸索阶段,如果超滤后直接进行液相,可能杂质会比较多吧,我也不是很懂啦...

你的离子交换柱是什么样的?用什么填料啊?
5楼2013-04-08 10:50:08
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by malele0208 at 2013-04-08 10:50:08
你的离子交换柱是什么样的?用什么填料啊?...

我的柱子比较大诶,是4*40cm的,填料用的是SP Sephadex C-25
6楼2013-04-16 09:20:57
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malele0208

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dandan_cece at 2013-04-16 09:20:57
我的柱子比较大诶,是4*40cm的,填料用的是SP Sephadex C-25...

凝胶过滤色谱需要特殊的设备吗?怎么控制流速啊?
7楼2013-04-18 08:26:08
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by malele0208 at 2013-04-18 08:26:08
凝胶过滤色谱需要特殊的设备吗?怎么控制流速啊?...

这个我没做过诶,我也不清楚,控制流速我用过恒流泵,如果做液相什么的,流速在电脑上设置一下就行了
8楼2013-04-19 10:06:22
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malele0208

金虫 (小有名气)

★ ★
zybpxy: 金币+2, 热情回帖,赞一个 2013-05-16 20:08:54
引用回帖:
8楼: Originally posted by dandan_cece at 2013-04-19 10:06:22
这个我没做过诶,我也不清楚,控制流速我用过恒流泵,如果做液相什么的,流速在电脑上设置一下就行了...

我就在想这个凝胶过滤怎么做呢,最近要做,也没有人指导我,不用恒流泵的话,简单调一下流速,用标样先走一次,每隔几分钟一收集,用紫外检测器检测,绘制曲线,找到峰值,记住出峰时间,再进行上样,再相应出峰时间进行收集,是这样的吗?
9楼2013-04-20 09:07:42
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

★ ★
树树8013: 金币+2, 谢谢参与应助,食品板块欢迎你 2013-04-21 20:25:45
引用回帖:
9楼: Originally posted by malele0208 at 2013-04-20 09:07:42
我就在想这个凝胶过滤怎么做呢,最近要做,也没有人指导我,不用恒流泵的话,简单调一下流速,用标样先走一次,每隔几分钟一收集,用紫外检测器检测,绘制曲线,找到峰值,记住出峰时间,再进行上样,再相应出峰时 ...

嗯,应该是这样,但是不用恒流泵怎么控制流速?
10楼2013-04-20 14:34:45
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