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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 高效液相色谱 关于有关物质的分离
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2010020170

金虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱 关于有关物质的分离

前几天刚把含量测定做完，这几天在做有关物质的检查，可是发现不管用哪个比例，两种物质都不能很好的分开，求高人指点。
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  • 附件 1 : 有关物质.doc
    • 2012-05-04 09:03:55, 40.5 K

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让自己活得精彩
1楼 2012-05-04 09:04:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
2010020170: 金币+10 2012-05-06 08:45:59
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2010020170 at 2012-05-04 15:20:18:
我的标准品里面有两个物质，要求用适合的比例分开，分离度要求达到2以上，可是我用乙腈浓度为55%、 45%时就有一个主峰，用40%以下的乙腈浓度时，总是分不开，我想问问大家是我的柱子的问题，还是流动相的问题，有 ...

所以建议走梯度试试，以50%磷酸盐-50%乙腈体系开始，到65%-35%（或70%-30%）止，先看看效果。并适度的调控流动相pH。如果分离度还不满意，或还是以上情况，建议更换色谱柱。
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守候在风中的宁静。
8楼2012-05-04 15:46:10
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普通回帖

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mouse103: 金币+3, 谢谢参与 2012-05-04 09:46:06
2010020170: 金币+10 2012-05-06 08:45:24
后面两个怎么裂峰了？第一个放大后有这种情况吗？是色谱柱不行了还是本来就有两个东西，没分开啊？

色谱柱问题
1、色谱柱再生
2、色谱柱更换

色谱条件问题
1、可以试试走梯度，磷酸盐从50%至65%，0~10min
2、磷酸盐用5%磷酸调控流动相pH
3、柱温30℃、35℃、40℃调试一下
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守候在风中的宁静。
2楼2012-05-04 09:18:46
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dlp2000

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhoudeli: 金币+1, 多谢参与 2012-05-04 09:59:58
http://wenku.baidu.com/view/7cbaaa6858fafab069dc02af.html
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啦啦啦啦
3楼2012-05-04 09:47:36
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yp3181321

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 鼓励讨论 2012-05-04 17:02:13
2楼磷酸盐走梯度？
我是不是看错了，磷酸盐从50%至65%，0~10min，这个比例走的话，盐析出在柱子里面更分不开，直接就毁柱子了
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4楼2012-05-04 13:28:08
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shihao611

禁虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-05-04 17:02:20
2010020170: 金币+10 2012-05-06 08:45:38
本帖内容被屏蔽
5楼2012-05-04 13:57:27
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2010020170

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-04 09:18:46:
后面两个怎么裂峰了？第一个放大后有这种情况吗？是色谱柱不行了还是本来就有两个东西，没分开啊？

色谱柱问题
1、色谱柱再生
2、色谱柱更换

色谱条件问题
1、可以试试走梯度，磷酸盐从50%至65%， ...

我的标准品里面有两个物质，要求用适合的比例分开，分离度要求达到2以上，可是我用乙腈浓度为55%、 45%时就有一个主峰，用40%以下的乙腈浓度时，总是分不开，我想问问大家是我的柱子的问题，还是流动相的问题，有没有什么更好的办法。
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让自己活得精彩
6楼2012-05-04 15:20:18
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2010020170

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shihao611 at 2012-05-04 13:57:27:
主要是色谱柱和流动相比列的问题
不行就更换色谱柱 调整流动相和比例

我的柱子刚换不久应该是没问题的，比例的话用乙腈浓度45%时是一个峰，40%以下的比例就会有两个峰了，但是没有分开，想问问有什么好的办法吗
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让自己活得精彩
7楼2012-05-04 15:22:46
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foxcl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2010020170 at 2012-05-04 15:20:18:
我的标准品里面有两个物质，要求用适合的比例分开，分离度要求达到2以上，可是我用乙腈浓度为55%、 45%时就有一个主峰，用40%以下的乙腈浓度时，总是分不开，我想问问大家是我的柱子的问题，还是流动相的问题，有 ...

不是柱子问题，主要还是流动相比例的问题，可以结合柱温一起来测试一下。
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9楼2012-05-04 22:02:21
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foxcl

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
2010020170: 金币+10 2012-05-06 08:46:14
引用回帖:
7楼: Originally posted by 2010020170 at 2012-05-04 15:22:46:
我的柱子刚换不久应该是没问题的，比例的话用乙腈浓度45%时是一个峰，40%以下的比例就会有两个峰了，但是没有分开，想问问有什么好的办法吗

哪种类型的物质？
流动相成分必须得是这样吗？
试试更低乙腈比例。根据你的图谱，峰2物质在乙腈中没有峰3溶解度大啊。
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10楼2012-05-04 22:07:01
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