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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

[求助] 一个有关用液相色谱分离纯化的问题 已有6人参与

用液相跑某一个样品,发现杂质峰比较多,欲将主峰物质进一步分离纯化,收集相应峰馏分。用普通的分析检测型的HPLC可以做到吗?还是用制备型色谱?我们导师的意见是前者,只要收集到一点点就可以,然后可以做定性分析...可我查文献里说都是用制备型色谱分离...这让我感到很恼火,希望懂色谱的高手指导一下,多谢
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我们都是宇宙中独一无二的个体,真正意识到这一点,那自卑便从人世间消失了
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by klicking at 2014-11-09 10:52:49
分析型的的确也可以,但是要提高进样量(保证分离度的前提),同时要重复多次才可以达到制备的效果,文献只是参考,要根据实际应用灵活把握;制备的话效率高,可能一次分离就足够你做定性分析了。

嗯,对这方面实在了解不多。能具体说一下分析型色谱怎么才能比较准确的收集到对应峰的样品吗?
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4楼2014-11-09 17:51:17
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by dongbangwang at 2014-11-09 14:21:32
要纯化,要有足够的供试品,当然最好是制备液相,进样量大;如果是普通分析型液相,也可以,但是一般浓度很小,进样量最多也就是150ul(还是自动进样器)手动进样也就是20ul的定量环,所以还不知道要收集多少次呢
...

对对对,进样量只有50微升,过完柱子冲出来的液体只有那么一丁点,追问一下,能具体说一说怎么收集对应峰的液体呢?
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5楼2014-11-09 17:53:23
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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8楼: Originally posted by forget8013 at 2014-11-09 22:03:23
肯定是制备好点,考虑固相萃取么,分析物与杂质性质差距大的话可以考虑

只要纯化 程度越高越好
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12楼2014-11-10 09:14:25
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 星辰大海8161 at 2014-11-09 22:16:24
其实要我说,比如一般分析HPLC,你跑一个样要15分钟,有馏分收集器的情况下,我宁愿用分析HPLC跑个10针,8针,也不愿去搞制备色谱,制备色谱流速一般在20 mL/min 上下5 mL/min,分分钟玩脱4L的试剂和水,外加额外的冲洗机器 ...

哈哈,这位仁兄说的有道理
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13楼2014-11-10 09:14:49
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by ypng at 2014-11-09 22:32:35
还有一个问题,液相一个梯度条件下的主峰不见得是单一物质,那你的红外光谱、紫外吸收都是没有意义的,除非你知道你要的物质的性质

嗯嗯,这一点确实值得考虑,多谢
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14楼2014-11-10 09:17:30
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
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15楼: Originally posted by zl781202 at 2014-11-10 11:27:39
用分析液相做制备,个人建议以下几点
1.选手动分析液相不选自动进样分析液相,原因:自动进样的分析液相最大进样量就100-150ul,要收集到足够量的物质,若是主成分还好,若是杂质成分的话,没个几百针是不够的,同 ...

谢谢,建议很中肯,但无法给金币了。送一朵红花吧,多谢多谢
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16楼2014-11-10 14:53:23
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

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15楼: Originally posted by zl781202 at 2014-11-10 11:27:39
用分析液相做制备,个人建议以下几点
1.选手动分析液相不选自动进样分析液相,原因:自动进样的分析液相最大进样量就100-150ul,要收集到足够量的物质,若是主成分还好,若是杂质成分的话,没个几百针是不够的,同 ...

您能告诉我具体的收集过程吗?我对这种分离方法不了解,谢谢了
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17楼2014-11-10 14:59:51
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
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19楼: Originally posted by zl781202 at 2014-11-11 10:53:18
你是指怎么收集的?这个很简单,只要你需要的成分峰在液相色谱上能够分离,就能够收集到纯度较高的组分。
如果你需要的组分峰前后都很干净,找个几毫升的样品瓶,在它刚出峰就可以在废液排出口进行收集了,出峰完 ...

你的解答太给力了,再送一朵红花,非常感谢
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20楼2014-11-11 12:00:45
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Stefanie旭

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
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18楼: Originally posted by zhangh62 at 2014-11-11 09:13:11
方法:
1、改变色谱柱的长度
2、改变流动相的组成比例
3、改变流速

谢谢回复
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21楼2014-11-11 12:01:10
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