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Stefanie旭铁虫 (正式写手)
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[求助]
有关制备型液相色谱的应用~~~
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各位大牛专家好：一瓶真菌发酵液，其中含某种抑制革兰氏阳性菌抑菌剂，疑为头孢，但不确定。已经过各种方法除去了发酵液中的大部分糖类、蛋白质、色素...经过查相关文献，可以用 制备型液相色谱进行进一步分离得到纯品，不知道可行否？利用该仪器，对样品有啥要求？量多大？柱子条件应该怎么选择？怎么确定保留时间？以及怎样收集纯品？希望高人指导...若此法不可行，另有鉴定纯度方法最妙！求高人赐教，感激不尽呐 |
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wjg6670
铁杆木虫 (正式写手)
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2楼2013-11-07 11:48:30
3楼2013-11-07 14:23:36
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Stefanie旭(release53代发): 金币+2, 谢谢 2013-11-07 18:17:08
Stefanie旭: 金币+18, ★★★★★最佳答案, 嗯，您的回复和我预想的差不多，还是您专业的解读后心里比较踏实啊，谢谢啦 2013-11-08 21:55:45
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绝对可行， 样品要求：易溶解，有无紫外吸收关系不大（有MS导向），样品的HP范围最好在4-10之间，无金属离子催化剂（如钯催化剂什么的），反相不能用二氯甲烷溶解，真相不能水这些都知道的哈？ 分离范围：1mg-？（上不封顶只要你能出得起钱！） 柱子条件：主要看你样品的性质了，克级的柱子狠多都是自己填的 250*50 mm 5u 的， 毫克级的基本是商品柱比较多，也有用HPLC分离的（比较慢） 保留时间：有对照品的话最好，无对照品给个结构式 或者 MS都行，样品情况好（因为你已经预处理过了）的话能把所有的物质都分离开。 收集纯品：通常是先在HPLC上开发方法，再转移到制备型液相色谱上去的。有对照品的话直接HPLC定位，再看目标峰的特定吸收波长下的吸收强弱（比如 220nm 254nm)为方法的转移提供参考，没对照有MS的话，直接上LCMS定位。然后就是转移到制备上了把峰切下来收集起来就OK了;如果什么都没有，那就只能全部收集，你自己拿回去再慢慢点板做核磁吧。 大概就这么多吧，希望能帮到你~ |
4楼2013-11-07 17:13:51
5楼2013-11-07 17:21:07
Stefanie旭
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6楼2013-11-08 21:45:53
Stefanie旭
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7楼2013-11-08 21:46:36
Stefanie旭
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，这一点你确实也说对了。我说咋跟老师提出这个方案的时候，他找各种理由挑刺啊，看来是怕花钱。。。
。没办法，我已经想了 很多方法查了很多文献，终于看见曙光了，却发现，困难重重，不过，真是谢谢你啊！ 8楼2013-11-08 21:58:01
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