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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 肝脏匀浆提蛋白遇到问题，求助！！
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野草妮妮

金虫 (小有名气)

[求助] 肝脏匀浆提蛋白遇到问题，求助！！已有2人参与

由于实验设计，模型会造成肝脏严重充血，那么做western提取肝脏蛋白之前肝脏需要做什么预处理吗？

我试过取适量肝脏直接匀浆，上清液颜色较红，不知道混有血清的话对目的蛋白检测有没有影响？

可以将组织在生理盐水中剪成小块，再把生理盐水换成裂解液再匀浆吗？
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1楼2014-04-17 17:39:27
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流, 2014-04-18 08:59:41
野草妮妮: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-07 21:38:55
在生理盐水里粗略的洗洗，换液，然后在生理盐水里剪成块洗，块不要太小。最后把组织块取出，加入裂解液就可以了。各组之间差不多就可以了。
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2楼2014-04-17 20:06:27
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野草妮妮

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-17 20:06:27
在生理盐水里粗略的洗洗，换液，然后在生理盐水里剪成块洗，块不要太小。最后把组织块取出，加入裂解液就可以了。各组之间差不多就可以了。

非常感谢！这样对蛋白的量有影响吗？
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3楼2014-04-17 20:49:50
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李小冬

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
野草妮妮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-18 12:34:38
需要看你是什么蛋白，可以先眼球放血，在放血过程中，用手指轻抚小鼠胸腹部，然后取肝脏样本。有必要，我一般用PBS洗……两种结果 对western结果影响不大，我做的目的蛋白是转录因子。
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哎呀呀
4楼2014-04-18 09:29:58
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kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 野草妮妮 at 2014-04-17 20:49:50
非常感谢！这样对蛋白的量有影响吗？...

还好，一般课题做完了肝脏都是用不完的，米粒大小的肝脏就够做蛋白western了，不放心你可以多切一点，但不要太多，如果实验周期长，用不完的蛋白到文章补实验的时候可能会降解，多了是浪费。
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5楼2014-04-18 11:04:42
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