应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位，最近刚刚接触绿色荧光蛋白GFP，熟悉GFP蛋白的大神们，请求帮助。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1453  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

去哪里看海

铁虫 (小有名气)

[求助] 各位，最近刚刚接触绿色荧光蛋白GFP，熟悉GFP蛋白的大神们，请求帮助。 已有3人参与

看到了关于GFP蛋白的各种应用，我想用它来做基因表达的定位，大概的思路是这样子的，请大家指教。
从NCBI上面查取GFP序列，用加有合适酶切位点的引物进行PCR扩增片段，连接到质粒，再连上自己要定位的基因，化转到酵母。
目前大致是这么想的，请问这种做法可取吗？GFP基因的模板从哪里买的到？拜托大家了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-08 15:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小小cool

金虫 (正式写手)
我有gfp的模板，可以联系我哈2755157061

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-05-09 07:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caihang

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-09 22:39:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2015-05-09 11:07:04
我找到连有GFP的质粒了，想请问一下，我是不是只要把目的基因和启动子简单连上就可以？我的目的基因是个小亚基。...

要看你的质粒是什么类型了，有的GFP在多克隆位点前面，有的在后面。有的需要自己添加启动子，有的不用。所以，你需要对照质粒的产品说明书看看。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-05-09 21:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-09 12:49:36
没做过酵母，只做过动物细胞。现在很多真核质粒上有GFP基因，另外，不只是GFP，还有其他的一些荧光蛋白，你也可以查查。
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-08 22:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

去哪里看海

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2015-05-08 22:40:06
没做过酵母，只做过动物细胞。现在很多真核质粒上有GFP基因，另外，不只是GFP，还有其他的一些荧光蛋白，你也可以查查。

我找到连有GFP的质粒了，想请问一下，我是不是只要把目的基因和启动子简单连上就可以？我的目的基因是个小亚基。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-09 11:07:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

去哪里看海

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小cool at 2015-05-09 07:56:39
我有gfp的模板，可以联系我哈2755157061

已经找到了，谢谢您。
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-09 11:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jacobbai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-09 12:49:46
这样，其实很简单，现在很多载体质粒都有GFP，然后你在载体上找到合适的表达位点把目的基因给弄进去就行了。然后在做转染，看表达。
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-09 11:15:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小cool

金虫 (正式写手)
是啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
7楼2015-05-09 20:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

去哪里看海

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by caihang at 2015-05-09 21:27:49
要看你的质粒是什么类型了，有的GFP在多克隆位点前面，有的在后面。有的需要自己添加启动子，有的不用。所以，你需要对照质粒的产品说明书看看。...

谢谢您了，我再研究研究说明书，有不明白的会再请教您。
赞一下 回复此楼
9楼2015-05-11 08:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人觉得楼主得确定这个GFP在酵母里是否能直接使用，就是说密码子优化过没有。当然，在酵母中用的GPF很常见，ncbi上的序列带的参考文献也会提到该序列是否在酵母中应用的。

另外，细胞内某基因的定位，我估计楼主的意识是该基因编码的蛋白的定位吧？如果是这个，那么很明显，楼主需要把gfp直接连接在那个基因后，而不是单独加启动子。不然的话，你的gpf单独表达了，怎么能定位要做的那个基因的蛋白呢？
赞一下 回复此楼
10楼2015-05-12 18:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 去哪里看海 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +7 梁富贵险中求 2026-04-04 7/350 2026-04-05 11:11 by imissbao
[考研] 材料334求调剂 +15 Eecho# 2026-04-03 15/750 2026-04-04 23:05 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-03 12/600 2026-04-04 21:46 by hemengdong
[考研] 求调剂 +3 ffyyu 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:03 by 蓝云思雨
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 321求调剂 +13 认真求上学 2026-04-02 13/650 2026-04-04 18:23 by macy2011
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +6 加一一九 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:57 by 聪明的大松鼠
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 化工调剂303分，过四级 +28 栖梧待风 2026-04-02 28/1400 2026-04-03 21:40 by qlm5820
[考研] 303求调剂 +9 DLkz1314. 2026-03-30 9/450 2026-04-03 18:34 by ls刘帅
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +8 贝呗钡钡 2026-03-30 8/400 2026-04-03 09:41 by hypershenger
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭