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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

[求助] 各位,最近刚刚接触绿色荧光蛋白GFP,熟悉GFP蛋白的大神们,请求帮助。 已有3人参与

看到了关于GFP蛋白的各种应用,我想用它来做基因表达的定位,大概的思路是这样子的,请大家指教。
从NCBI上面查取GFP序列,用加有合适酶切位点的引物进行PCR扩增片段,连接到质粒,再连上自己要定位的基因,化转到酵母。
目前大致是这么想的,请问这种做法可取吗?GFP基因的模板从哪里买的到?拜托大家了
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小小cool

金虫 (正式写手)

我有gfp的模板,可以联系我哈2755157061

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2015-05-09 07:56:39
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caihang

铜虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-09 22:39:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2015-05-09 11:07:04
我找到连有GFP的质粒了,想请问一下,我是不是只要把目的基因和启动子简单连上就可以?我的目的基因是个小亚基。...

要看你的质粒是什么类型了,有的GFP在多克隆位点前面,有的在后面。有的需要自己添加启动子,有的不用。所以,你需要对照质粒的产品说明书看看。
8楼2015-05-09 21:27:49
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普通回帖

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-09 12:49:36
没做过酵母,只做过动物细胞。现在很多真核质粒上有GFP基因,另外,不只是GFP,还有其他的一些荧光蛋白,你也可以查查。
2楼2015-05-08 22:40:06
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2015-05-08 22:40:06
没做过酵母,只做过动物细胞。现在很多真核质粒上有GFP基因,另外,不只是GFP,还有其他的一些荧光蛋白,你也可以查查。

我找到连有GFP的质粒了,想请问一下,我是不是只要把目的基因和启动子简单连上就可以?我的目的基因是个小亚基。
4楼2015-05-09 11:07:04
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小cool at 2015-05-09 07:56:39
我有gfp的模板,可以联系我哈2755157061

已经找到了,谢谢您。
5楼2015-05-09 11:07:18
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jacobbai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-09 12:49:46
这样,其实很简单,现在很多载体质粒都有GFP,然后你在载体上找到合适的表达位点把目的基因给弄进去就行了。然后在做转染,看表达。
6楼2015-05-09 11:15:26
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小小cool

金虫 (正式写手)

是啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2015-05-09 20:41:17
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by caihang at 2015-05-09 21:27:49
要看你的质粒是什么类型了,有的GFP在多克隆位点前面,有的在后面。有的需要自己添加启动子,有的不用。所以,你需要对照质粒的产品说明书看看。...

谢谢您了,我再研究研究说明书,有不明白的会再请教您。
9楼2015-05-11 08:11:40
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zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人觉得楼主得确定这个GFP在酵母里是否能直接使用,就是说密码子优化过没有。当然,在酵母中用的GPF很常见,ncbi上的序列带的参考文献也会提到该序列是否在酵母中应用的。

另外,细胞内某基因的定位,我估计楼主的意识是该基因编码的蛋白的定位吧?如果是这个,那么很明显,楼主需要把gfp直接连接在那个基因后,而不是单独加启动子。不然的话,你的gpf单独表达了,怎么能定位要做的那个基因的蛋白呢?
10楼2015-05-12 18:50:45
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