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siyuansing

银虫 (小有名气)

[求助] 真菌破碎方法 已有5人参与

需要破碎真菌,提取胞内的小分子化合物,做定量分析,找到了几种方法:
1.超生破碎,查了挺多资料,有说超生破碎的效果很差,不能够破碎完全;
2.液氮研磨,师兄说液氮研磨是最好的破碎细胞的方法,能够破碎完全,不知道具体情况如何;
3.碱裂解,操作复杂,耗时较长。

还请各位大神帮忙分析一下几种破碎方法的优劣,谢谢各位了!
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浴火月

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流! 2015-04-09 08:17:47
siyuansing: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-04-09 21:41:10
超声一般破碎原核细胞效果较好,真核较难破碎;我们一般也是用液氮研磨破碎真核细胞的。
关于碱裂解,目前我们做的是关于酵母的,其他菌的情况还不太清楚。操作确实繁杂~~
2楼2015-04-08 21:28:25
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贝叶竹青

木虫 (著名写手)

种类很多,应该根据实验室条件来选择最合适的方式

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
come to meet a different you.努力到无能为力,拼搏到感动自己。
3楼2015-04-09 02:13:27
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4楼2015-04-09 02:23:34
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Freedomqqc

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
siyuansing: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-04-09 21:41:40
我研一做的酵母,提取酵母DNA。我当时使用的是omega真菌试剂盒。它使用的是酶和玻璃珠双破碎方法。你可以适用一下。祝好
科研不易,希望自己能够坚持
5楼2015-04-09 10:19:05
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
工业上用高压均质机
职业无分贵贱,做事要有格调
6楼2015-04-09 10:19:27
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binbosmile

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
siyuansing: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-04-09 21:42:03
主要是破壁酶和一些蛋白酶的复合使用,具体使用什么酶得看其成分。
想得太多,做的太少
7楼2015-04-09 16:00:44
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cashq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
siyuansing: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2015-04-13 21:50:39
我之前提取酵母的mRNA和内源蛋白时候用的是玻璃珠+多样品组织研磨机破碎细胞的。我提取的样品比较多,所以都是把酵母放EP管然后成批研磨的~效果杠杠的

用超声做的话,要考虑升温问题,麻烦,而且出来的破碎效果还不好,很多破碎不完全的。。。
碱裂解最坑了。。做少量样品测试的时候试了下,操作超级麻烦,产量还不高。。。果断放弃了~
还试过用酶的,蛋白质搞到失活了这种伤心事我就不说了T^T

反正实验室有条件的话,我还是推荐用玻璃珠+多样品组织研磨机破壁咯~
生活在于折腾呐
8楼2015-04-13 17:49:55
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rainsunne

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cashq at 2015-04-13 17:49:55
我之前提取酵母的mRNA和内源蛋白时候用的是玻璃珠+多样品组织研磨机破碎细胞的。我提取的样品比较多,所以都是把酵母放EP管然后成批研磨的~效果杠杠的

用超声做的话,要考虑升温问题,麻烦,而且出来的破碎效果还 ...

我也是做酵母的,现在要破碎的酵母量比较大。而且要求破碎效果要又快又好的才行,超声波完全不给力啊!!请问可以详细些说说具体操作吗?仪器什么的。谢谢了啊!在线等,急!
9楼2015-04-16 09:46:42
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cashq

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by rainsunne at 2015-04-16 09:46:42
我也是做酵母的,现在要破碎的酵母量比较大。而且要求破碎效果要又快又好的才行,超声波完全不给力啊!!请问可以详细些说说具体操作吗?仪器什么的。谢谢了啊!在线等,急!...

我是1毫升酵母一管,一次破碎24管。90秒破碎就达到80%差不多了。
数量和效果都挺可观的~
多样品组织研磨机用的是国产的,上海净信。
我晚些有空再开个帖说说具体操作和参数什么的吧,挺多人问的。。。
你要是急就先自己搜一下,操作参数什么的我也是问他们公司要的
生活在于折腾呐
10楼2015-04-17 10:53:24
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