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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 含6×His 标签的重组蛋白的纯化为何不用组氨酸洗脱
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反对派

银虫 (正式写手)

[交流] 含6×His 标签的重组蛋白的纯化为何不用组氨酸洗脱 已有1人参与

如题，为何不直接用含组氨酸的洗脱液洗脱，而要用咪唑洗脱液？
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1楼 2015-03-31 18:26:27
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反对派: 金币+2, 不错，但是楼主出口伤人 2015-04-01 11:59:43
本帖内容被屏蔽
6楼2015-04-01 10:14:08
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反对派: 金币+2, 非常感谢！ 2015-04-03 08:00:38
引用回帖:
9楼: Originally posted by 反对派 at 2015-04-01 10:14:32
你是否尝试过用组氨酸洗脱？有无参考文献？...

"Competitive elution with imidazole or (less commonly histidine), increasing competitor concentration in either a step-wise or gradient manner."
http://strucbio.biologie.uni-kon ... ex.php/Purification
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
11楼2015-04-02 23:11:57
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普通回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
成本太高。
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2楼2015-03-31 20:21:17
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lxzk

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
效果也不好吧，得用六组胺酸短肽，效果参考flag洗脱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-04-01 01:21:05
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反对派

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxzk at 2015-04-01 01:21:05
效果也不好吧，得用六组胺酸短肽，效果参考flag洗脱

没有说到点子上，看来你们不懂
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4楼2015-04-01 07:57:27
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反对派

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2015-03-31 20:21:17
成本太高。

没有说到点子上，看来你们不懂
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5楼2015-04-01 07:57:35
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反对派

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mataomatao at 2015-04-01 10:14:08
目测楼主SB，这种问题要看镍柱对应是哪个配基NTA,IDA等大体相同，要知道咪唑只是HIS的侧链的一部分；氨基酸去竞争目标蛋白对于空间的要求是不是很有效，以及氨基酸对于偏中性的溶解性有没有咪唑好，成本等前人肯定有 ...

你分析得有道理，要是你有相关文献支持，发给我再感谢不过了。
这种问题我还没有看到有人提出来，估计相当多的人只顾按说明书来做实验，而很少想过这个问题吧。
我们实验室20来个做过蛋白纯化实验的人，没有一个能答出来为什么？
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7楼2015-04-01 11:59:50
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反对派: 金币+1, 你做过吗？ 2015-04-02 06:13:54

就是成本问题，楼上那个已经给出答案了
可以用组氨酸洗脱，组氨酸洗脱效果比咪唑好。但是没必要啊，提高一点咪唑浓度就够了
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2015-04-02 00:40:51
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反对派

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-04-02 00:40:51

就是成本问题，楼上那个已经给出答案了
可以用组氨酸洗脱，组氨酸洗脱效果比咪唑好。但是没必要啊，提高一点咪唑浓度就够了

你是否尝试过用组氨酸洗脱？有无参考文献？
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9楼2015-04-02 06:14:32
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 反对派 at 2015-04-02 06:14:32
你是否尝试过用组氨酸洗脱？有无参考文献？...

大肠杆菌为什么要用37℃培养而不用100℃培养啊？你能提供大肠杆菌在100℃不适合培养的文献吗？或者适合37℃培养的文献呢？是不是大家都跟风然后就都用37℃了呢？
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10楼2015-04-02 11:16:58
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