| 查看: 1315 | 回复: 2 | ||
[求助]
Red重组的引物设计问题 已有1人参与
|
|
我完全按照文献的敲除引物序列，用Red重组进行敲除大肠杆菌ClpP基因，引物设计如下： 上游引物：50bp的基因上游同源序列+20bp的pKD3配对序列 下游引物：50bp的基因下游同原序列+20bp的pKD3配对序列 此方法敲除成功了。 但是我用相同的策略敲除DnaK基因的时候却无论如何也筛不到交换菌株（即DnaK基因被氯霉素基因替换掉的）。用的是跟上面相同的pKD3配对序列，只是把前面50bp换成DnaK的上下游同源序列，实验方法与敲除ClpP基因时是完全一样的，可是就是敲除不掉。 我想请教一下，这样的情况最可能是什么原因呢？是不是因为50bp同源臂，那么应该怎么设计同源臂的序列？我之前设计的50bp同源臂能够保证它与DnaK基因上下游的序列同源，但是没有考虑GC含量之类的其他条件，会有些什么因素影响引物设计呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 同源重组阳性单菌落问题
已经有8人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- Red重组老是不成功，求救
已经有49人回复
- 求助：大豆基因组3000bpDNA扩增，P不出来
已经有4人回复
- 大肠杆菌Red重组法基因敲除求助
已经有6人回复
- 求助：本人准备做一个细菌中某个基因的敲除，想用同源重组的方法做
已经有6人回复
- 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？
已经有8人回复
- 基因敲入，同源重组
已经有10人回复
- 关于PFU酶扩增
已经有18人回复
- 【求助/交流】细菌同源重组的同源臂最少需要多少bp呢？
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除
已经有21人回复
- 【求助/交流】关于目的基因的克隆
已经有12人回复
- 【求助/交流】Red同源重组技术整合位点的选择
已经有9人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
2楼2015-03-31 17:00:05
张凡云
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 13421.9
- 散金: 3094
- 红花: 13
- 帖子: 4112
- 在线: 1486.2小时
- 虫号: 2426111
- 注册: 2013-04-19
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2015-05-31 13:37:37
