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wobaby

铁虫 (著名写手)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳pET28

做琼脂糖凝胶电泳实验,质粒为pET28.  与药物抚育24h,48h。loding buffer已经到顶了,但药物与质粒的混合物,爬的高度都只有凝胶的1/3,未爬起来,也就无法识别两者的作用效果。
   不知道问题出在哪里?
1)质粒有问题?浓度太大?
     单独的质粒做对照,也只爬1/3
2) 凝胶也不会有问题,以前一样操作
    大牛帮忙指点下,谢谢!
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http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
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wobaby

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-28 00:02:30
pet28表达行质粒,正常片段是在5500左右,但常会在9000及其12000处出现环状和超螺旋,出现几率及高。

谢谢,我的问题是,爬凝胶板高度问题。正常情况是爬到4/5的高度。目前爬loading buffer爬到4/5,但是质粒才爬到1/3。
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
3楼2015-03-28 10:58:26
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781055707

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-28 23:29:20
pet28表达行质粒,正常片段是在5500左右,但常会在9000及其12000处出现环状和超螺旋,出现几率及高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-03-28 00:02:30
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781055707

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wobaby: 金币+5 2015-03-30 06:32:54
BUFFER是沉淀质粒,它在电泳里跑的本来就和质粒不是一起的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-03-28 23:25:22
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wobaby

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-28 23:25:22
BUFFER是沉淀质粒,它在电泳里跑的本来就和质粒不是一起的。

刚才想到了问题所在,就向你说的buffer直观显示爬的状态,但是不同的质粒可能由于分子量不同,在相同电压条件下,爬的高度也不同,所以增加电泳时间,可以解决爬板才有1/3的问题,谢谢
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
5楼2015-03-30 06:32:50
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