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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳pET28
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wobaby

铁虫 (著名写手)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳pET28

做琼脂糖凝胶电泳实验，质粒为pET28.  与药物抚育24h，48h。loding buffer已经到顶了，但药物与质粒的混合物，爬的高度都只有凝胶的1/3，未爬起来，也就无法识别两者的作用效果。
   不知道问题出在哪里？
1）质粒有问题？浓度太大？
     单独的质粒做对照，也只爬1/3
2) 凝胶也不会有问题，以前一样操作
    大牛帮忙指点下，谢谢！
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http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
1楼 2015-03-27 21:48:51
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781055707

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-28 23:29:20
pet28表达行质粒，正常片段是在5500左右，但常会在9000及其12000处出现环状和超螺旋，出现几率及高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-03-28 00:02:30
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wobaby

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-28 00:02:30
pet28表达行质粒，正常片段是在5500左右，但常会在9000及其12000处出现环状和超螺旋，出现几率及高。

谢谢，我的问题是，爬凝胶板高度问题。正常情况是爬到4/5的高度。目前爬loading buffer爬到4/5，但是质粒才爬到1/3。
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http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
3楼2015-03-28 10:58:26
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781055707

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wobaby: 金币+5 2015-03-30 06:32:54
BUFFER是沉淀质粒，它在电泳里跑的本来就和质粒不是一起的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-28 23:25:22
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wobaby

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-28 23:25:22
BUFFER是沉淀质粒，它在电泳里跑的本来就和质粒不是一起的。

刚才想到了问题所在，就向你说的buffer直观显示爬的状态，但是不同的质粒可能由于分子量不同，在相同电压条件下，爬的高度也不同，所以增加电泳时间，可以解决爬板才有1/3的问题，谢谢
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5楼2015-03-30 06:32:50
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