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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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胡霞liu

新虫 (初入文坛)

[求助] WB 蛋白技术 已有2人参与

各位WB达人，请问做磷酸化蛋白WB的时候，蛋白样品处理方面需要注意一些什么呢？收了细胞直接冻-80好一些，还是细胞裂解之后冻-80呢，还是加loading buffer煮完之后存放好一些呢？
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1楼 2015-03-25 20:18:18
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胡霞liu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sc5921041 at 2015-03-26 01:26:13
磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB，一般不会冻起来的，除非你要用的是非常好用的commercial抗体，比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等， 并且注意裂解细胞时 要加磷酸酶抑制剂。

你好，我需要收4个时间点的细胞一起做WB，这样就面临一个问题，要么收一次细胞裂解一次，然后冻起来，最后统一煮蛋白变性，做WB；要么收一次细胞就冻起来，收完后统一提蛋白，变性，跑电泳。所以达不到收完细胞就马上做WB这个标准。请问该如何处理呢？
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3楼2015-03-26 09:02:00
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-26 08:24:14
磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB，一般不会冻起来的，除非你要用的是非常好用的commercial抗体，比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等， 并且注意裂解细胞时 要加磷酸酶抑制剂。
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nostalgia
2楼2015-03-26 01:26:13
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以加药时间分开，收集时间在一起就可以了；实在不行你就煮完放冰箱冻存就没问题了
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4楼2015-03-26 15:38:37
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