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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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胡霞liu

新虫 (初入文坛)

[求助] WB 蛋白技术 已有2人参与

各位WB达人,请问做磷酸化蛋白WB的时候,蛋白样品处理方面需要注意一些什么呢?收了细胞直接冻-80好一些,还是细胞裂解之后冻-80呢,还是加loading buffer煮完之后存放好一些呢?
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胡霞liu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sc5921041 at 2015-03-26 01:26:13
磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB,一般不会冻起来的,除非你要用的是非常好用的commercial抗体,比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等, 并且注意裂解细胞时 要加磷酸酶抑制剂。

你好,我需要收4个时间点的细胞一起做WB,这样就面临一个问题,要么收一次细胞裂解一次,然后冻起来,最后统一煮蛋白变性,做WB;要么收一次细胞就冻起来,收完后统一提蛋白,变性,跑电泳。所以达不到收完细胞就马上做WB这个标准。请问该如何处理呢?
3楼2015-03-26 09:02:00
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-26 08:24:14
磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB,一般不会冻起来的,除非你要用的是非常好用的commercial抗体,比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等, 并且注意裂解细胞时 要加磷酸酶抑制剂。
nostalgia
2楼2015-03-26 01:26:13
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lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以加药时间分开,收集时间在一起就可以了;实在不行你就煮完放冰箱冻存就没问题了
4楼2015-03-26 15:38:37
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