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胡霞liu

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[求助] WB 蛋白技术已有2人参与

各位WB达人，请问做磷酸化蛋白WB的时候，蛋白样品处理方面需要注意一些什么呢？收了细胞直接冻-80好一些，还是细胞裂解之后冻-80呢，还是加loading buffer煮完之后存放好一些呢？

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1楼 2015-03-25 20:18:18

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sc5921041

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【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-26 08:24:14

磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB，一般不会冻起来的，除非你要用的是非常好用的commercial抗体，比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等，并且注意裂解细胞时要加磷酸酶抑制剂。

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nostalgia

2楼2015-03-26 01:26:13

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胡霞liu

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2楼: Originally posted by sc5921041 at 2015-03-26 01:26:13
磷酸化蛋白检测最好收了细胞马上做WB，一般不会冻起来的，除非你要用的是非常好用的commercial抗体，比如Cell Signaling 的p-AKT(s473), p-S6等等，并且注意裂解细胞时要加磷酸酶抑制剂。

你好，我需要收4个时间点的细胞一起做WB，这样就面临一个问题，要么收一次细胞裂解一次，然后冻起来，最后统一煮蛋白变性，做WB；要么收一次细胞就冻起来，收完后统一提蛋白，变性，跑电泳。所以达不到收完细胞就马上做WB这个标准。请问该如何处理呢？

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3楼2015-03-26 09:02:00

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