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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western为何要用SDS-page胶
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新虫 (正式写手)

[交流] western为何要用SDS-page胶 已有2人参与

讨论个问题：Western大家都很熟悉了：SDS-page后转膜在一抗二抗显色。但问题来了，一抗有时候是抗转膜蛋白空间构象的抗体，而SDS-page会打断空间构象，这样不就无法检测到了吗？
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1楼 2015-03-18 20:52:03
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新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 11:18:36
Western不一定要跑SDS-PAGE，非变性胶也可以做的。抗体识别的不是整个蛋白，是很小的抗原决定簇，通常与整个蛋白的空间构象关系不大。而且，制备抗体时的所用抗原通常是变性蛋白或者多肽，本身已经不是识别蛋白的空 ...

很全面，高手！
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5楼2015-03-19 19:54:34
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conanzzz

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看LZ发了好几个帖子了,估计LZ可能是要做寡聚蛋白,这种情况下可能应该首先用非还原性Page对蛋白进行分离,也就是Tricine-Page,转膜能否成功不是很了解,牵扯到寡聚体不同情况构象也不同,你可能需要选择不同的抗体~~
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2楼2015-03-19 10:51:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Western不一定要跑SDS-PAGE，非变性胶也可以做的。抗体识别的不是整个蛋白，是很小的抗原决定簇，通常与整个蛋白的空间构象关系不大。而且，制备抗体时的所用抗原通常是变性蛋白或者多肽，本身已经不是识别蛋白的空间构象了。所以在变性条件下仍然可以做Western。而且通常变性失去折叠，蛋白与抗体的识别性能更好。
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3楼2015-03-19 11:18:36
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256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by conanzzz at 2015-03-19 10:51:30
看LZ发了好几个帖子了,估计LZ可能是要做寡聚蛋白,这种情况下可能应该首先用非还原性Page对蛋白进行分离,也就是Tricine-Page,转膜能否成功不是很了解,牵扯到寡聚体不同情况构象也不同,你可能需要选择不同的抗体~~

有心
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4楼2015-03-19 19:54:19
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