24小时热门版块排行榜    

查看: 1035  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)

[求助] 血清蛋白双向电泳

第一次做双向电泳,样品为绵羊血清(未去白蛋白、IGg),上样量240ug,IPG胶条是GE公司的:13cm,PH 3-10
等电聚焦条件:被动水化 15h
50V 2h
300V 3h
1000V 3h
3000V 3h
8000V 3h
8000V 80000vh
500v 10v
SDS-page条件:15mA/胶条,30min;45mA/胶条,至溴酚蓝跑至胶下沿。
知道为什么会没有蛋白点,操作是按照GE公司双向电泳操作手册做的,希望知道原因的大侠帮助解释一下,不胜感谢!

血清蛋白双向电泳
20150317_155447.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

用心做事
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-13 07:53:02
固定液的配方看上去没有问题,但是水化不好也不至于一个点都没有吧,最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么...

裂解液、水化液均按照GE公司操作手册配制,水化液配方:尿素 2.1g ,硫脲 0.76g CHAPS 0.1g, DTT14mg,IPG Buffer 25ul, 1%溴酚蓝储液 10ul,至5ml。分装1ml后-20℃冻存。
DTT,IPG Buffer及溴酚蓝为使用前新鲜加入。
蛋白是血清总蛋白,裂解后离心,取上清定量,确定水化体系
用心做事
9楼2015-05-13 10:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

haze12344

银虫 (小有名气)

你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE?可以先取10μL跑个看看有没有条带
生物你好
2楼2015-04-17 15:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-17 15:43:50
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE?可以先取10μL跑个看看有没有条带

跑过,有的,条带很清楚
用心做事
3楼2015-05-11 13:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-11 13:00:09
跑过,有的,条带很清楚...

那你做的时候电压能上到8000v么?
生物你好
4楼2015-05-11 15:19:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 5/250 2026-03-02 06:41 by 汪!?!
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见