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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ZRFZYY

银虫 (正式写手)

[求助] 血清蛋白双向电泳

第一次做双向电泳,样品为绵羊血清(未去白蛋白、IGg),上样量240ug,IPG胶条是GE公司的:13cm,PH 3-10
等电聚焦条件:被动水化 15h
50V 2h
300V 3h
1000V 3h
3000V 3h
8000V 3h
8000V 80000vh
500v 10v
SDS-page条件:15mA/胶条,30min;45mA/胶条,至溴酚蓝跑至胶下沿。
知道为什么会没有蛋白点,操作是按照GE公司双向电泳操作手册做的,希望知道原因的大侠帮助解释一下,不胜感谢!

血清蛋白双向电泳
20150317_155447.jpg
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用心做事
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haze12344

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-12 13:31:19
固定液:400ml乙醇+100ml冰醋酸,定容至1000ml。过夜固定。我问过GE工程师,他说要么是水化不好,要么是第二相蛋白未进入SDS-PAGE,但我觉得我是按要求做的啊,怎么会出现这两种可能...

固定液的配方看上去没有问题,但是水化不好也不至于一个点都没有吧,最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么
生物你好
8楼2015-05-13 07:53:02
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haze12344

银虫 (小有名气)

你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE?可以先取10μL跑个看看有没有条带
生物你好
2楼2015-04-17 15:43:50
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ZRFZYY

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-17 15:43:50
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE?可以先取10μL跑个看看有没有条带

跑过,有的,条带很清楚
用心做事
3楼2015-05-11 13:00:09
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haze12344

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-11 13:00:09
跑过,有的,条带很清楚...

那你做的时候电压能上到8000v么?
生物你好
4楼2015-05-11 15:19:43
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