应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 血清蛋白双向电泳
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1062  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ZRFZYY

银虫 (正式写手)

[求助] 血清蛋白双向电泳

第一次做双向电泳，样品为绵羊血清（未去白蛋白、IGg），上样量240ug,IPG胶条是GE公司的：13cm,PH 3-10
等电聚焦条件：被动水化 15h
50V 2h
300V 3h
1000V 3h
3000V 3h
8000V 3h
8000V 80000vh
500v 10v
SDS-page条件：15mA/胶条，30min;45mA/胶条，至溴酚蓝跑至胶下沿。
不知道为什么会没有蛋白点，操作是按照GE公司双向电泳操作手册做的，希望知道原因的大侠帮助解释一下，不胜感谢！

血清蛋白双向电泳
20150317_155447.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
用心做事
1楼 2015-03-18 11:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE？可以先取10μL跑个看看有没有条带
赞一下 回复此楼
生物你好
2楼2015-04-17 15:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-17 15:43:50
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE？可以先取10μL跑个看看有没有条带

跑过，有的，条带很清楚
赞一下 回复此楼
用心做事
3楼2015-05-11 13:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-11 13:00:09
跑过，有的，条带很清楚...

那你做的时候电压能上到8000v么？
赞一下 回复此楼
生物你好
4楼2015-05-11 15:19:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-11 15:19:43
那你做的时候电压能上到8000v么？...

可以的
回复此楼
用心做事
5楼2015-05-12 10:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-12 10:31:37
可以的...

那就比较奇怪，看上去聚焦没有什么问题为什么没有点？难道你银染固定没做好？
赞一下 回复此楼
生物你好
6楼2015-05-12 10:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-12 10:47:55
那就比较奇怪，看上去聚焦没有什么问题为什么没有点？难道你银染固定没做好？...

固定液：400ml乙醇+100ml冰醋酸，定容至1000ml。过夜固定。我问过GE工程师，他说要么是水化不好，要么是第二相蛋白未进入SDS-PAGE，但我觉得我是按要求做的啊，怎么会出现这两种可能
赞一下 回复此楼
用心做事
7楼2015-05-12 13:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-12 13:31:19
固定液：400ml乙醇+100ml冰醋酸，定容至1000ml。过夜固定。我问过GE工程师，他说要么是水化不好，要么是第二相蛋白未进入SDS-PAGE，但我觉得我是按要求做的啊，怎么会出现这两种可能...

固定液的配方看上去没有问题，但是水化不好也不至于一个点都没有吧，最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么
赞一下 回复此楼
生物你好
8楼2015-05-13 07:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-13 07:53:02
固定液的配方看上去没有问题，但是水化不好也不至于一个点都没有吧，最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么...

裂解液、水化液均按照GE公司操作手册配制，水化液配方：尿素 2.1g ，硫脲 0.76g CHAPS 0.1g， DTT14mg，IPG Buffer 25ul, 1%溴酚蓝储液 10ul,至5ml。分装1ml后-20℃冻存。
DTT,IPG Buffer及溴酚蓝为使用前新鲜加入。
蛋白是血清总蛋白，裂解后离心，取上清定量，确定水化体系
赞一下 回复此楼
用心做事
9楼2015-05-13 10:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-13 10:32:41
裂解液、水化液均按照GE公司操作手册配制，水化液配方：尿素 2.1g ，硫脲 0.76g CHAPS 0.1g， DTT14mg，IPG Buffer 25ul, 1%溴酚蓝储液 10ul,至5ml。分装1ml后-20℃冻存。
DTT,IPG Buffer及溴酚蓝为使用前新鲜加入 ...

看着都是没有问题的啊，水化体系又在常温孵育吗？还有就是加了水化液的样品跑过普通SDS-PAGE没
赞一下 回复此楼
生物你好
10楼2015-05-14 07:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ZRFZYY 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 4/200 2026-03-28 14:30 by QiMing7
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 277跪求调剂 +5 1915668 2026-03-27 9/450 2026-03-28 09:58 by zhshch
[考研] 材料与化工考研调剂 +17 孅華 2026-03-22 17/850 2026-03-28 08:35 by WYUMater
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 303求调剂 +7 安忆灵 2026-03-22 8/400 2026-03-27 11:46 by sanrepian
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭