应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 血清蛋白双向电泳
121/2返回列表12下一页
查看: 1038  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ZRFZYY

银虫 (正式写手)

[求助] 血清蛋白双向电泳

第一次做双向电泳，样品为绵羊血清（未去白蛋白、IGg），上样量240ug,IPG胶条是GE公司的：13cm,PH 3-10
等电聚焦条件：被动水化 15h
50V 2h
300V 3h
1000V 3h
3000V 3h
8000V 3h
8000V 80000vh
500v 10v
SDS-page条件：15mA/胶条，30min;45mA/胶条，至溴酚蓝跑至胶下沿。
不知道为什么会没有蛋白点，操作是按照GE公司双向电泳操作手册做的，希望知道原因的大侠帮助解释一下，不胜感谢！

血清蛋白双向电泳
20150317_155447.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
用心做事
1楼 2015-03-18 11:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE？可以先取10μL跑个看看有没有条带
赞一下 回复此楼
生物你好
2楼2015-04-17 15:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-17 15:43:50
你的样品有没有跑过普通的SDS-PAGE？可以先取10μL跑个看看有没有条带

跑过，有的，条带很清楚
赞一下 回复此楼
用心做事
3楼2015-05-11 13:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-11 13:00:09
跑过，有的，条带很清楚...

那你做的时候电压能上到8000v么？
赞一下 回复此楼
生物你好
4楼2015-05-11 15:19:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-11 15:19:43
那你做的时候电压能上到8000v么？...

可以的
回复此楼
用心做事
5楼2015-05-12 10:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-12 10:31:37
可以的...

那就比较奇怪，看上去聚焦没有什么问题为什么没有点？难道你银染固定没做好？
赞一下 回复此楼
生物你好
6楼2015-05-12 10:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-12 10:47:55
那就比较奇怪，看上去聚焦没有什么问题为什么没有点？难道你银染固定没做好？...

固定液：400ml乙醇+100ml冰醋酸，定容至1000ml。过夜固定。我问过GE工程师，他说要么是水化不好，要么是第二相蛋白未进入SDS-PAGE，但我觉得我是按要求做的啊，怎么会出现这两种可能
赞一下 回复此楼
用心做事
7楼2015-05-12 13:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-12 13:31:19
固定液：400ml乙醇+100ml冰醋酸，定容至1000ml。过夜固定。我问过GE工程师，他说要么是水化不好，要么是第二相蛋白未进入SDS-PAGE，但我觉得我是按要求做的啊，怎么会出现这两种可能...

固定液的配方看上去没有问题，但是水化不好也不至于一个点都没有吧，最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么
赞一下 回复此楼
生物你好
8楼2015-05-13 07:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZRFZYY

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by haze12344 at 2015-05-13 07:53:02
固定液的配方看上去没有问题，但是水化不好也不至于一个点都没有吧，最多点少一点。可以了解下水化液配方和蛋白处理方法么...

裂解液、水化液均按照GE公司操作手册配制，水化液配方：尿素 2.1g ，硫脲 0.76g CHAPS 0.1g， DTT14mg，IPG Buffer 25ul, 1%溴酚蓝储液 10ul,至5ml。分装1ml后-20℃冻存。
DTT,IPG Buffer及溴酚蓝为使用前新鲜加入。
蛋白是血清总蛋白，裂解后离心，取上清定量，确定水化体系
赞一下 回复此楼
用心做事
9楼2015-05-13 10:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ZRFZYY at 2015-05-13 10:32:41
裂解液、水化液均按照GE公司操作手册配制，水化液配方：尿素 2.1g ，硫脲 0.76g CHAPS 0.1g， DTT14mg，IPG Buffer 25ul, 1%溴酚蓝储液 10ul,至5ml。分装1ml后-20℃冻存。
DTT,IPG Buffer及溴酚蓝为使用前新鲜加入 ...

看着都是没有问题的啊，水化体系又在常温孵育吗？还有就是加了水化液的样品跑过普通SDS-PAGE没
赞一下 回复此楼
生物你好
10楼2015-05-14 07:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ZRFZYY 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭