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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 有木有人知道，提取植物RNA的分子水平的原理，是怎样与DNA分离的？
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大懒猫爱生物

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人知道，提取植物RNA的分子水平的原理，是怎样与DNA分离的？ 已有1人参与

提取植物RNA的分子水平原理，是怎样与DNA分离的，百度上的都没有详细的说明DNA和蛋白时怎样分离出去的，细胞内部环境在提取液中经历了什么过程？知道的人解答下，O(∩_∩)O谢谢！
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1楼 2015-03-18 09:59:11
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1002432022

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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大懒猫爱生物: 金币+5 2015-03-19 10:58:34
在植物的RNA抽提实验中，广泛应用的是TRIzol法。
TRIzol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使ＲＮＡ释放出来的同时，保护ＲＮＡ的完整性 。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA 和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
TRIzol的主要成分是酚.主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质得到释放.同时 TRIzol里加入了可以抑制RNA酶的胍盐.作用自然是抑制RNA酶了.氯仿可以使蛋白变性 ,降低蛋白的溶解度,异丙醇是沉淀RNA的,降低了RNA在氯仿中的溶解度.因为这些试剂都会影响后续实验,所以用酒精洗一到两遍.一是酒精可以溶解一些沉淀中可能的有机物杂质,二是洗掉异丙醇,氯仿试剂,酒精的易挥发性 在这里的到运用。
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2楼2015-03-18 15:15:34
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大懒猫爱生物

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1002432022 at 2015-03-18 15:15:34
在植物的RNA抽提实验中，广泛应用的是TRIzol法。
TRIzol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使ＲＮＡ释放出来的同时，保护ＲＮＡ的完整性 。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上 ...

谢谢你的解答，那DNA沉降的原因是什么呢，为什么在裂解后DNA没有在水层呢？
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3楼2015-03-18 16:45:16
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