应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 细菌PCR总是点的有些样不出条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1611  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liaona

铜虫 (小有名气)

[求助] 细菌PCR总是点的有些样不出条带 已有6人参与

提取土壤总DNA，利用细菌V6-V8区引物968F/1401R进行PCR扩增，点的样总是有那么几个不出条带，不清楚什么情况，有师姐说是我做PCR加样操作出问题，可是每次做8个，加样操作都是一样的啊，怎么就有些样p出来，有些没有出来呢。PCR25ul体系：上下游引物各1.5ul，2.5mM each dNTPs 2ul，10xPCR Buffer 2.5 ul，Taq聚合酶0.25ul，模板DNA 2 ul，无菌水 15.25 ul。PCR扩增条件：94 oC变性5min,接着20个循环（94 oC变性1 min，67 oC退火1 min，72 oC延伸1 min，每个循环退火温度降0.5 oC），接着 15个循环（94 oC变性1 min，57oC退火1 min，72 oC延伸1 min，每个循环退火温度降0.5 oC），最后再72 oC延伸10 min。

细菌PCR总是点的有些样不出条带
10.30.2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-16 17:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释一下DNA或者再纯化一下DNA，试试。
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-16 19:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板是一样的土壤细菌吗？还有就是如果是 的话，在加模板之前是否混合均匀了？
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
2楼2015-03-16 18:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaona

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kuaile5420 at 2015-03-16 18:02:47
模板是一样的土壤细菌吗？还有就是如果是 的话，在加模板之前是否混合均匀了？

不是的哦！每个点样孔对应我试验处理，共8个土壤处理样品分别提取的DNA。
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-16 18:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liaona at 2015-03-16 18:24:44
不是的哦！每个点样孔对应我试验处理，共8个土壤处理样品分别提取的DNA。...

那你使用的引物是针对某种细菌的还是所有的都有啊？如果是特异的话，会不会这种土壤中不含有这种菌？如果不是特异的，就自己再重新做一次PCR试试？还有就是你自己要确定你都提取到了DNA，这个问题可以通过测定每种土壤菌的DNA浓度，并且可以通过计算使得每种土壤菌的模板中含有相同的DNA，这样更能说明模板的问题还是其他操作的问题。因为如果DNA浓度差异很大的话，使用同一台PCR仪同时进行PCR最终的DNA差异会越来越大的，跑胶显示是需要一定量的DNA 才可以的啊。祝你成功啊~
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
5楼2015-03-16 21:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +8 lin0039 2026-03-26 8/400 2026-03-28 08:00 by Iveryant
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 339求调剂 +4 烤麦芽 2026-03-27 5/250 2026-03-27 13:23 by 752105528
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭