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angnay

铜虫 (著名写手)

[求助] 体外转录没有条带的问题已有1人参与

大家好,最近在做体外转录实验,转录完用dnase除dna,沉淀后, 再拿乙醇洗。 水溶解后跑变形的琼脂糖凝胶电泳,什么条带都没有,用nanodrop测rna浓度是50ng/ul,这是转录成功了吗?为什么电泳没有条带啊?一般转录完后的rna浓度是多少啊?
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sssnnnfff

新虫 (初入文坛)

你好!我和你遇到了同样的问题,体外转录效率很低,条带非常弱而且时有时无,一纯化就什么都没有了。你的问题解决了吗?跪求!!!
2楼2017-05-22 12:50:38
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SEU喂96

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sssnnnfff at 2017-05-22 12:50:38
你好!我和你遇到了同样的问题,体外转录效率很低,条带非常弱而且时有时无,一纯化就什么都没有了。你的问题解决了吗?跪求!!!

同问,没有特异条带,是弥散的状态,或者是很多个条带,是否是体外转录后被降解了?
3楼2018-07-03 17:01:54
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个,你需要跑PAGE胶。50ng/ul是比较低,PAGE才能看到。
我觉得你可能做的有问题,一般产量应该是ug级的。转录完不用除dna,直接用纯化RNA的试剂盒就行了。RNA产量是原始DNA模版的百万倍。
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-07-04 10:41:39
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