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angnay

铜虫 (著名写手)

[求助] 体外转录没有条带的问题 已有1人参与

大家好，最近在做体外转录实验，转录完用dnase除dna，沉淀后， 再拿乙醇洗。 水溶解后跑变形的琼脂糖凝胶电泳，什么条带都没有，用nanodrop测rna浓度是50ng/ul，这是转录成功了吗？为什么电泳没有条带啊？一般转录完后的rna浓度是多少啊？
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1楼 2015-03-16 17:27:30
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sssnnnfff

新虫 (初入文坛)
你好！我和你遇到了同样的问题，体外转录效率很低，条带非常弱而且时有时无，一纯化就什么都没有了。你的问题解决了吗？跪求！！！
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2楼2017-05-22 12:50:38
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SEU喂96

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sssnnnfff at 2017-05-22 12:50:38
你好！我和你遇到了同样的问题，体外转录效率很低，条带非常弱而且时有时无，一纯化就什么都没有了。你的问题解决了吗？跪求！！！

同问，没有特异条带，是弥散的状态，或者是很多个条带，是否是体外转录后被降解了？
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3楼2018-07-03 17:01:54
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个，你需要跑PAGE胶。50ng/ul是比较低，PAGE才能看到。
我觉得你可能做的有问题，一般产量应该是ug级的。转录完不用除dna，直接用纯化RNA的试剂盒就行了。RNA产量是原始DNA模版的百万倍。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-07-04 10:41:39
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