24小时热门版块排行榜    

查看: 7208  |  回复: 6

greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:T7体外转录 已有1人参与

最近做的T7体外转录觉得效果不好,产率较低。胶回收之后几乎没啥东西了。我的模版不是PCR产物,而是公司合成的两条链退火之后做为模版。正义链5‘-3’是T7 promoter序列,反义链3’-5‘是和T7互补配对的序列,后面接上要转录的序列。
想请教大家如此的模版,20ul体系加入10pmol会不会太少呢?产率不高还有什么原因?模版示意图:

[ Last edited by greenygreen on 2013-1-23 at 20:32 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhzhemin

新虫 (初入文坛)

遇到同样的问题,求助~
2楼2013-10-24 22:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-25 10:04:09
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
3楼2013-10-25 09:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

980979990

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录

最近也在做结果一直不是很理想,能给一下你的转录体系参考吗?
4楼2014-01-05 09:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

你可以把这段序列,先连接到一个克隆载体上,然后设计一对引物扩增你要转录的这段序列,胶回收,这是的DNA量远比你合成回来的DNA量高,再做体外转录,能提高产物得率
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-01-05 15:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 980979990 at 2014-01-05 09:46:22
最近也在做结果一直不是很理想,能给一下你的转录体系参考吗?...

http://www.thermoscientificbio.c ... uct-information.pdf
我是按照这个说明书第6页操作的
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
6楼2014-01-06 10:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18428388448

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录

你好,请问你的PCR产物纯化之后的浓度是多少ng/uL啊?我是PCR胶回收的DNA,浓度为50ng/ul,T7转录需要1ug的DNA,我这个DNA浓度还是有点低吧?需要将DNA浓缩嘛?
7楼2021-11-12 21:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greenygreen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见