应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：T7体外转录
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 7061  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：T7体外转录 已有1人参与

最近做的T7体外转录觉得效果不好，产率较低。胶回收之后几乎没啥东西了。我的模版不是PCR产物，而是公司合成的两条链退火之后做为模版。正义链5‘-3’是T7 promoter序列，反义链3’-5‘是和T7互补配对的序列，后面接上要转录的序列。
想请教大家如此的模版，20ul体系加入10pmol会不会太少呢？产率不高还有什么原因？模版示意图：

[ Last edited by greenygreen on 2013-1-23 at 20:32 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-23 20:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhzhemin

新虫 (初入文坛)
遇到同样的问题，求助~
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-24 22:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-25 10:04:09
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录
赞一下(1人) 回复此楼
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
3楼2013-10-25 09:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

980979990

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录

最近也在做结果一直不是很理想，能给一下你的转录体系参考吗？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-01-05 09:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

你可以把这段序列，先连接到一个克隆载体上，然后设计一对引物扩增你要转录的这段序列，胶回收，这是的DNA量远比你合成回来的DNA量高，再做体外转录，能提高产物得率
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-01-05 15:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 980979990 at 2014-01-05 09:46:22
最近也在做结果一直不是很理想，能给一下你的转录体系参考吗？...

http://www.thermoscientificbio.c ... uct-information.pdf
我是按照这个说明书第6页操作的
赞一下 回复此楼
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
6楼2014-01-06 10:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18428388448

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录

你好，请问你的PCR产物纯化之后的浓度是多少ng/uL啊？我是PCR胶回收的DNA，浓度为50ng/ul，T7转录需要1ug的DNA，我这个DNA浓度还是有点低吧？需要将DNA浓缩嘛？
赞一下 回复此楼
7楼2021-11-12 21:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greenygreen 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +6 zhubinhao 2026-03-27 6/300 2026-03-27 10:23 by 尽舜尧1
[考研] 340求调剂 +3 jhx777 2026-03-27 3/150 2026-03-27 08:56 by 不吃魚的貓
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +5 李嘉图·S·路 2026-03-23 5/250 2026-03-27 00:42 by wxiongid
[考研] 305求调剂 +4 哇卢卡库 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:58 by sanrepian
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭