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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：T7体外转录 已有1人参与

最近做的T7体外转录觉得效果不好，产率较低。胶回收之后几乎没啥东西了。我的模版不是PCR产物，而是公司合成的两条链退火之后做为模版。正义链5‘-3’是T7 promoter序列，反义链3’-5‘是和T7互补配对的序列，后面接上要转录的序列。
想请教大家如此的模版，20ul体系加入10pmol会不会太少呢？产率不高还有什么原因？模版示意图：

[ Last edited by greenygreen on 2013-1-23 at 20:32 ]
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1楼 2013-01-23 20:17:33
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zhzhemin

新虫 (初入文坛)
遇到同样的问题，求助~
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2楼2013-10-24 22:36:17
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real-time

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-25 10:04:09
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录
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一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
3楼2013-10-25 09:39:16
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980979990

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录

最近也在做结果一直不是很理想，能给一下你的转录体系参考吗？
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4楼2014-01-05 09:46:22
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

你可以把这段序列，先连接到一个克隆载体上，然后设计一对引物扩增你要转录的这段序列，胶回收，这是的DNA量远比你合成回来的DNA量高，再做体外转录，能提高产物得率
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-01-05 15:29:34
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real-time

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 980979990 at 2014-01-05 09:46:22
最近也在做结果一直不是很理想，能给一下你的转录体系参考吗？...

http://www.thermoscientificbio.c ... uct-information.pdf
我是按照这个说明书第6页操作的
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一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
6楼2014-01-06 10:15:59
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18428388448

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样，我是PCR产物纯化后做的，浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR，纯化后再体外转录

你好，请问你的PCR产物纯化之后的浓度是多少ng/uL啊？我是PCR胶回收的DNA，浓度为50ng/ul，T7转录需要1ug的DNA，我这个DNA浓度还是有点低吧？需要将DNA浓缩嘛？
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7楼2021-11-12 21:29:47
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