24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 7080  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:T7体外转录 已有1人参与

最近做的T7体外转录觉得效果不好,产率较低。胶回收之后几乎没啥东西了。我的模版不是PCR产物,而是公司合成的两条链退火之后做为模版。正义链5‘-3’是T7 promoter序列,反义链3’-5‘是和T7互补配对的序列,后面接上要转录的序列。
想请教大家如此的模版,20ul体系加入10pmol会不会太少呢?产率不高还有什么原因?模版示意图:

[ Last edited by greenygreen on 2013-1-23 at 20:32 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18428388448

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录

你好,请问你的PCR产物纯化之后的浓度是多少ng/uL啊?我是PCR胶回收的DNA,浓度为50ng/ul,T7转录需要1ug的DNA,我这个DNA浓度还是有点低吧?需要将DNA浓缩嘛?
7楼2021-11-12 21:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zhzhemin

新虫 (初入文坛)

遇到同样的问题,求助~
2楼2013-10-24 22:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-25 10:04:09
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
3楼2013-10-25 09:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

980979990

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7体外转录
但是做的不一样,我是PCR产物纯化后做的,浓度非常高
很可能是你的浓度不高引起的
建议你先用T7做一下PCR,纯化后再体外转录

最近也在做结果一直不是很理想,能给一下你的转录体系参考吗?
4楼2014-01-05 09:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +33 xaw. 2026-04-11 34/1700 2026-04-13 21:23 by gretl
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +24 yzyzx 2026-04-12 27/1350 2026-04-13 21:22 by gretl
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +21 ioodiiij 2026-04-08 21/1050 2026-04-13 20:40 by biomen
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +15 振—TZ 2026-04-10 16/800 2026-04-13 14:11 by 张zhihao
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 296求调剂 +8 汪!?! 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:02 by 逆水乘风
[考研] 085402通信工程调剂,有4项学科竞赛国奖(电赛国二),硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550, 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 08工学 309分求调剂 +6 Yin DY 2026-04-08 6/300 2026-04-10 09:18 by Delta2012
[考研] 085404,285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
信息提示
请填处理意见