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onizukacus

金虫 (初入文坛)

[求助] 药动标准曲线的问题 已有2人参与

1.请问大家做药动的时候对照品是应该用纯甲醇来配还是流动相来配呢?我用的是waters液质,流动相是甲醇:水——50:50
我以前做的时候是用纯甲醇配的对照品进样,但是时不时的对照品会出现两个峰,多出来的峰比目标峰面积小很多,看到有
人说可能是溶剂效应,那么用流动相来配时不时就可以消除了?


2.我的样品最后三倍体积甲醇是沉淀蛋白后取上清液进样2μL,会不会使我低浓度的样品响应值过低?(我的定量限大概是39pg)大部分文献用上清液进样是进的20μL,但是液质又不能进那么大的体积,还是说我应该沉淀蛋白后氮气吹干再用10μL甲醇(或者流动相?)复溶进样2μL?
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
onizukacus: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-02-04 18:56:02
1.溶剂化效应是指你的溶样溶剂对样品的溶解能力远大于流动相的溶解能力,色谱峰常常出现裂峰,不呈正太分布的现象,尤其是保留时间较短的峰比较明显,溶剂峰也很难看。解决方法就是使得溶样溶剂对样品的溶剂能力和流动相保持相近,或使用流动相。
2.一般药动学要求要考察到3-5个半衰期或最大血药浓度的1/20,如果说你的定量限可以检测到,就没有必要再浓缩样品了
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
2楼2015-02-03 22:43:36
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七海雪舞

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我平时也是用流动相溶解标准品的
3楼2015-02-04 10:07:37
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onizukacus

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2015-02-03 22:43:36
1.溶剂化效应是指你的溶样溶剂对样品的溶解能力远大于流动相的溶解能力,色谱峰常常出现裂峰,不呈正太分布的现象,尤其是保留时间较短的峰比较明显,溶剂峰也很难看。解决方法就是使得溶样溶剂对样品的溶剂能力和流 ...

你好,哪像我的这种情况您建议用流动相来配对照品吗?多出来的那个峰我可以忽略掉吗?

还有药动中的定量限不是指信噪比10:1的浓度吗?如果用这个的话我的标准曲线最低点就是40pg
我的最大浓度是200ng左右,如果用20/1的话我的标准曲线做最低点到10ng就可以了吗?
现在就是搞不清楚应该选哪一个作为标准曲线的最低点。
药动标准曲线的问题
IMG_0309.JPG

4楼2015-02-04 10:08:45
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voyager88

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by onizukacus at 2015-02-04 10:08:45
你好,哪像我的这种情况您建议用流动相来配对照品吗?多出来的那个峰我可以忽略掉吗?

还有药动中的定量限不是指信噪比10:1的浓度吗?如果用这个的话我的标准曲线最低点就是40pg
我的最大浓度是200ng左右,如果 ...

关键是你想要做多长?5个药物半衰期足矣
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5楼2015-02-04 10:13:49
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by onizukacus at 2015-02-04 10:08:45
你好,哪像我的这种情况您建议用流动相来配对照品吗?多出来的那个峰我可以忽略掉吗?

还有药动中的定量限不是指信噪比10:1的浓度吗?如果用这个的话我的标准曲线最低点就是40pg
我的最大浓度是200ng左右,如果 ...

建议你读一下药代动力学指导原则
http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1616/101019.html
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6楼2015-02-04 10:14:41
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voyager88

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by onizukacus at 2015-02-04 10:08:45
你好,哪像我的这种情况您建议用流动相来配对照品吗?多出来的那个峰我可以忽略掉吗?

还有药动中的定量限不是指信噪比10:1的浓度吗?如果用这个的话我的标准曲线最低点就是40pg
我的最大浓度是200ng左右,如果 ...

你机器定量限那么高,只是说明你的机器灵敏度高,并不说明你的数据可靠。第一,定量限并不是直接的溶液,而是血样里药物的最低检测限,定量限必须连续进6个样品,而且要重复出来,RSD%符合要求才行;第二,定量限虽然可以达到那么低,但是你的线性、精密度和回收率能否满足要求?线性至少3个9,精密度、回收率最好在10%以内,不得超过20%;第三,对照品可以不用流动相溶解,你可以使用别的溶剂配成母液,再加母液到血浆中,按血样的处理方法处理后进样,药动学测定的是血液中药物浓度,而不是溶液浓度,二者不一样,因为其中还有一个提取回收率的问题。你先看知道原则吧
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7楼2015-02-04 10:25:12
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onizukacus

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by voyager88 at 2015-02-04 10:25:12
你机器定量限那么高,只是说明你的机器灵敏度高,并不说明你的数据可靠。第一,定量限并不是直接的溶液,而是血样里药物的最低检测限,定量限必须连续进6个样品,而且要重复出来,RSD%符合要求才行;第二,定量限虽 ...

哦,好的,谢谢我先看一看。

那我对照品多出来的那个峰有什么解决办法吗?
8楼2015-02-04 11:44:25
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voyager88

金虫 (著名写手)

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8楼: Originally posted by onizukacus at 2015-02-04 11:44:25
哦,好的,谢谢我先看一看。

那我对照品多出来的那个峰有什么解决办法吗?...

你不是用质谱吗,先看一下它分子量,排除一下是否是杂质峰啊,如果不是再考虑溶剂化效应
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9楼2015-02-04 12:27:08
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