24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

木欣欣60

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 160.4
散金: 4
帖子: 55
在线: 27.9小时
虫号: 3095908
注册: 2014-03-28
性别: MM
专业: 蔬菜学与瓜果学

[求助] 做菌p时空载也能跑出目的条带已有6人参与

现已将目的基因与表达载体连接转化，但是挑菌时做菌p用空的表达载体质粒去跑PCR，结果发现和目的片段有同样的大小，导致菌P都无法筛出阳性克隆，结果拿去测序，全是失败。有哪位大神能帮我分析下吗？空的表达载体pcr能p出目的基因的大小片段，这种情况正常不？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

菌液pcr,坐等求助已经有20人回复
PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？已经有11人回复
菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？已经有13人回复
关于构载体过程中PCR验证正确但是测序为空载体的困惑已经有7人回复
蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带已经有12人回复
未插入目的片段的空载体质粒怎么扩增出目的条带，求解，求真相！！！！已经有4人回复
求助关于双酶切空载跑胶没有条带！已经有15人回复
RT-PCR时GAPDH能跑出来，但目的条带跑不出来~~ 已经有7人回复
PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？已经有9人回复
【求助/交流】分子克隆已经有15人回复
【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体已经有26人回复

顺顺利利做实验，高高兴兴搞科研，幸幸福福地毕业。

1楼 2015-01-27 16:23:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

木欣欣60

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 160.4
散金: 4
帖子: 55
在线: 27.9小时
虫号: 3095908
注册: 2014-03-28
性别: MM
专业: 蔬菜学与瓜果学

引用回帖:

6楼: Originally posted by logowang at 2015-01-27 21:38:09
一，注意你使用的引物，可能存在引物使用不当，比如在你的情况下colony pcr应选择载体特异上游引物+基因特异下游引物（或者颠倒），这样回避免直接使用一对载体特异引物所造成的影响。

二，检查你的载体来源，由 ...

嗯，前辈说的对，1.我现在正把我的载体质粒送去测序，测35s启动子到我需要的酶切位点之间的片段。确保载体无错。2.我之前也用载体的35s启动子和我的目的条带下游引物做的菌p，我以为是自己把两者的退火温度没选好所以没扩出条带来。然后就还是用的自己的目的基因的上下游去菌p。3.我在菌p时都会选择较亮条带送去测序，弱弱的条带我就把它认为杂菌了。4.现在是越来越奇怪了，我之前涂200u的菌液都长了很多，过了几天再涂什么都没长，唉。。。前辈。