| 查看: 3283 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zzlei金虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白过镍柱，出现大量沉淀，请教各位 已有1人参与
|
|
|
破碎离心完之后推滤了一下，然后过镍柱，分别用20mL 20mM咪唑（25mM Tris，100mM NaCl)、80mM咪唑、150mM咪唑、350mM咪唑、500mM咪唑洗脱，发现自150mM就能洗出目的蛋白，但杂蛋白也很多。350mM洗脱时蛋白发生沉淀，且15mL的量基本能把柱子里的蛋白全洗脱下来，500时基本就什么都没有了。 试着将350的沉淀用硫酸铵溶解，但效果不好，透析用25mM Tris，300mM NaCl，仍然沉淀挥之不去。透析一直在4℃下搅拌进行。请教各位高手们，是咪唑浓度太高导致了沉淀？沉淀的蛋白是因为变性而无法再溶解？透析液我分别调了100mM NaCl、200mM、300mM，还适当加了5%、10%甘油试着溶解沉淀，但都没有效果。希望大家帮我分析一下到底是什么原因引起的。纯化N多次了，每次都是350的咪唑就沉淀了 |
回复此楼» 猜你喜欢
考博求助
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 镍柱有很多杂蛋白是缓冲液的问题还是什么问题？
已经有11人回复
- 包涵体上镍离子柱纯化后，洗脱收集的液体中目的蛋白不见了
已经有10人回复
- His标签蛋白纯化过程中容易沉淀，提高盐离子、改变pH是否可以？
已经有7人回复
- 求助酶的镍柱纯化
已经有8人回复
- 镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来
已经有11人回复
- 透析后蛋白有沉淀
已经有3人回复
- 求助，镍柱纯化蛋白，蛋白挂不上去
已经有17人回复
- 亲和镍柱那个公司的好？
已经有6人回复
- 蛋白过镍柱纯化，在用咪唑洗脱后需要做透析，透析怎么做？？？
已经有15人回复
- 关于镍柱纯化，急求，！！
已经有12人回复
- 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？
已经有20人回复
- 关于镍柱纯化蛋白
已经有10人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 蛋白纯化镍柱、分子筛
已经有9人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么镍柱纯化可溶性蛋白，电泳结果总是显示不纯呢？
已经有9人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
已经有19人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
7楼2015-01-30 08:51:58
zzlei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 806.4
- 散金: 100
- 帖子: 263
- 在线: 84.1小时
- 虫号: 2384026
- 注册: 2013-03-28
- 性别: GG
- 专业: 无机药物化学
2楼2015-01-27 10:49:52
zzlei
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 806.4
- 散金: 100
- 帖子: 263
- 在线: 84.1小时
- 虫号: 2384026
- 注册: 2013-03-28
- 性别: GG
- 专业: 无机药物化学
3楼2015-01-27 10:50:47
4楼2015-01-28 14:23:51
10