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寒露携阳

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC 两种标品出峰时间居然一样,是怎么回事? 已有11人参与

基线很平,峰型很好,用的是20%的乙腈做流动相,等度洗脱,两种标品结构式只相差一个甲基,结果无论单标还是混标,两个样品的单标和混标出峰时间几乎一样,都是只有一个峰,怎么回事啊?求教各位亲人~
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大橡树

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
寒露携阳: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-03 18:36:04
没分开呗,更换流动相条件,或者改为梯度洗脱,或者换用合适的柱子。
为天地立心,为生民立命,为往圣继绝学,为万世开太平
2楼2015-01-26 09:16:44
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Arlen0899

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两种物质在该流动相中出峰时间差不多,可以换个流动相

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3楼2015-01-26 09:18:46
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望陈莫及1984

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也许就是极性完全相同,分不开,这个问题在液质联用(HPLC-MS/MS)上就是小事一桩,不是所选的分子量根本进不去二级质谱。
命中注定的自作自受
9楼2015-01-26 13:20:32
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普通回帖

huihui2255365

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
走梯度试试,流动相不合适同时分开,应该是两个物质结构式太接近,换个柱子试试
4楼2015-01-26 10:16:23
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

保留时间一样是正常现象,更何况只相差一个甲基。你可以尝试改为梯度洗脱,如果HPLC分不开你可以用UPLC。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
5楼2015-01-26 11:43:22
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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寒露携阳: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-03 18:36:25
如果能隐约看到一个肩峰,通过调整梯度是可能分开的。否则试试换溶剂,换缓冲盐体系和pH。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-01-26 13:02:07
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-25 17:02:07
如果能隐约看到一个肩峰,通过调整梯度是可能分开的。否则试试换溶剂,换缓冲盐体系和pH。

忘了提一句如果有条件换柱子往往效果最直接,最明显。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-01-26 13:03:45
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mxy216

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
相差一个甲基,极性应该差不多的,你是用的色谱柱粒径多少啊,可考虑换个3.5μ的试试,流动相更改难度不小。希望有用
8楼2015-01-26 13:06:24
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关关5484826

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你至少要把梯度条件摸索一遍,找到最好效果,如果还是分不开才考虑换柱子,走等度分不开很正常

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-01-26 13:21:45
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