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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 两种标品出峰时间居然一样，是怎么回事？
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寒露携阳

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC 两种标品出峰时间居然一样，是怎么回事？ 已有11人参与

基线很平，峰型很好，用的是20%的乙腈做流动相，等度洗脱，两种标品结构式只相差一个甲基，结果无论单标还是混标，两个样品的单标和混标出峰时间几乎一样，都是只有一个峰，怎么回事啊？求教各位亲人~
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人生在世，有所不为，有所必为！
1楼 2015-01-26 09:14:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

大橡树

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒露携阳: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-03 18:36:04
没分开呗，更换流动相条件，或者改为梯度洗脱，或者换用合适的柱子。
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为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平
2楼2015-01-26 09:16:44
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Arlen0899

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两种物质在该流动相中出峰时间差不多，可以换个流动相

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3楼2015-01-26 09:18:46
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望陈莫及1984

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也许就是极性完全相同，分不开，这个问题在液质联用（HPLC-MS/MS）上就是小事一桩，不是所选的分子量根本进不去二级质谱。
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命中注定的自作自受
9楼2015-01-26 13:20:32
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普通回帖

huihui2255365

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
走梯度试试，流动相不合适同时分开，应该是两个物质结构式太接近，换个柱子试试
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4楼2015-01-26 10:16:23
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
保留时间一样是正常现象，更何况只相差一个甲基。你可以尝试改为梯度洗脱，如果HPLC分不开你可以用UPLC。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
5楼2015-01-26 11:43:22
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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寒露携阳: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-03 18:36:25
如果能隐约看到一个肩峰，通过调整梯度是可能分开的。否则试试换溶剂，换缓冲盐体系和pH。

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6楼2015-01-26 13:02:07
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-25 17:02:07
如果能隐约看到一个肩峰，通过调整梯度是可能分开的。否则试试换溶剂，换缓冲盐体系和pH。

忘了提一句如果有条件换柱子往往效果最直接，最明显。

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7楼2015-01-26 13:03:45
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mxy216

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
相差一个甲基，极性应该差不多的，你是用的色谱柱粒径多少啊，可考虑换个3.5μ的试试，流动相更改难度不小。希望有用
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8楼2015-01-26 13:06:24
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关关5484826

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你至少要把梯度条件摸索一遍，找到最好效果，如果还是分不开才考虑换柱子，走等度分不开很正常

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10楼2015-01-26 13:21:45
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