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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒上启动子的替换
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萤火之光

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒上启动子的替换 已有2人参与

最近在想把质粒上原有的启动子换成自己想要的，首要的去除原有的启动子就没成功。我的想法很简单，就是在已知启动子序列的前后设计一对反向引物扩增整个质粒（当然要去除原有质粒），但是PCR一直扩增不出来，是不是我的思路太简单了？求各路大神支个招，万分感谢。。。
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1楼 2015-01-24 21:05:26
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-25 10:03:49
萤火之光: 金币+10 2015-01-26 11:04:32
方法没问题，有时候引物不一定合适，或者片段太长，你的PCR酶不好用。或者模板特殊
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2楼2015-01-24 22:30:50
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
萤火之光: 金币+5 2015-01-26 11:04:18
干嘛不直接酶切去除然后加上你的
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3楼2015-01-25 09:48:20
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萤火之光

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-25 09:48:20
干嘛不直接酶切去除然后加上你的

嫌烦就避开了，因为得先用带酶切的引物扩整个质粒再酶切，后续引入新启动子也得通过酶切连接。。
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4楼2015-01-26 11:04:03
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萤火之光

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-01-24 22:30:50
方法没问题，有时候引物不一定合适，或者片段太长，你的PCR酶不好用。或者模板特殊

自己又思考了下，应该是我引物有问题，多谢了。。
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5楼2015-01-26 11:05:13
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)
想请问下楼主 最后怎么做的呢？ 把整个质粒P下来可以吗？
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6楼2018-01-31 12:56:03
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DYQ1231

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Leo郭浩 at 2018-01-31 12:56:03
想请问下楼主 最后怎么做的呢？ 把整个质粒P下来可以吗？

想问下楼主最后弄好了吗 现在我也在弄替换启动子实验 想求教一二 求指点
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7楼2021-04-03 21:41:34
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by DYQ1231 at 2021-04-03 21:41:34
想问下楼主最后弄好了吗 现在我也在弄替换启动子实验 想求教一二 求指点...

gibson无缝克隆。超级简单啊。

发自小木虫Android客户端
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
8楼2021-04-04 22:58:50
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