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意孤城_金虫 (正式写手)
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[求助]
想往一个载体中插入Kan抗性基因该怎么做
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想往通过PCR方法向一个载体中插入一个Kan抗性基因（必须插入，因为要改造载体，不能选kan抗性原载体）。请问我PCR过程中除了要包含ATG开始编码Kan序列外，他的启动子和终止子序列该怎么寻找。NCBI上查了 没找到。有没有知道的 急求 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】应助回帖
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不知你准备从哪个载体上扩增（pET系列中好像有几个是ka抗性，可以参考）。 一般，原核的表达调控元件比较简单（启动子在atg上游100bp以内，终止子在TAG、TAA or TGA下游100bp以内，启动子一般有表明显的-10区(TATAAT）和-35区结构，你可以自己找一找，而强终止子有明显的发夹结构，你可以试着找一找，如果嫌麻烦，可以直接扩增包含编码区上下游各100bp的序列，一般就足够了。 goodluck! |
3楼2013-04-01 22:11:59
意孤城_
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2楼2013-04-01 16:27:51
gyesang
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4楼2013-04-02 20:31:07
意孤城_
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5楼2013-04-02 20:37:55
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6楼2013-04-02 20:41:34
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:41:19
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http://partsregistry.org/Promoters/Catalog/Ecoli/Constitutive 这个网站上有kat的启动子信息 |
7楼2013-04-02 22:44:55
8楼2013-04-03 01:03:21
wt3532
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