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意孤城_

金虫 (正式写手)

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[求助] 想往一个载体中插入Kan抗性基因该怎么做

想往通过PCR方法向一个载体中插入一个Kan抗性基因（必须插入，因为要改造载体，不能选kan抗性原载体）。请问我PCR过程中除了要包含ATG开始编码Kan序列外，他的启动子和终止子序列该怎么寻找。NCBI上查了没找到。有没有知道的急求

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【分子生物】EPI帖

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1楼 2013-04-01 16:27:07

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酶切专家

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-01 22:31:30
意孤城_: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-04-02 09:38:38
myprayer: 金币+2, MolEPI+1, 应助指数+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-03 08:35:23

不知你准备从哪个载体上扩增（pET系列中好像有几个是ka抗性，可以参考）。
一般，原核的表达调控元件比较简单（启动子在atg上游100bp以内，终止子在TAG、TAA or TGA下游100bp以内，启动子一般有表明显的-10区(TATAAT）和-35区结构，你可以自己找一找，而强终止子有明显的发夹结构，你可以试着找一找，如果嫌麻烦，可以直接扩增包含编码区上下游各100bp的序列，一般就足够了。
goodluck!