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yanglei174

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么替换启动子,以及引物怎么设计~~~

最近在做启动子替换,要替换的启动子大小为62bp,老师的意思就是直接合成,但我现在不知道需要合成哪些,直接合成那60bp,是不是回来后期实验不好做啊???还有合成需要注意哪些问题~~谢谢大家了
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2464514082

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 17:47:22
引物设计用Primer5.0就可以,下载个使用说明,上面有评分什么的
2楼2013-08-30 17:08:32
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匿名

用户注销 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
3楼2013-08-31 08:00:35
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-09-01 02:54:18
你是想替换启动子中的部分片段(62bp)?如果那样的话直接合成对于的片段,然和分别和上、下游片段做个overlap PCR获得替换后的全长启动子,然和重新连接到载体就好
互助互励,共奋共进!!
4楼2013-08-31 08:56:51
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wahogui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-01 02:54:25
你可以合成两条互补的引物,列如  
     5-AAATTTGCCCCYYY-3
3-XXXTTTAAACGGGG-5

X,y代表酶切缺口,如果是平末端连接那么就不要x,y碱基了,两链条引物合成以后直接通过退火皆可以变成双连DNA了,估算好浓度就可以用来做连接实验了。
5楼2013-08-31 10:22:51
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