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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么替换启动子，以及引物怎么设计~~~
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yanglei174

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么替换启动子，以及引物怎么设计~~~

最近在做启动子替换，要替换的启动子大小为62bp，老师的意思就是直接合成，但我现在不知道需要合成哪些，直接合成那60bp，是不是回来后期实验不好做啊？？？还有合成需要注意哪些问题~~谢谢大家了
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1楼 2013-08-30 16:11:56
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-01 02:54:18
你是想替换启动子中的部分片段（62bp）？如果那样的话直接合成对于的片段，然和分别和上、下游片段做个overlap PCR获得替换后的全长启动子，然和重新连接到载体就好
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-08-31 08:56:51
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2464514082

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 17:47:22
引物设计用Primer5.0就可以，下载个使用说明，上面有评分什么的
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2楼2013-08-30 17:08:32
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匿名

用户注销 (小有名气)
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3楼2013-08-31 08:00:35
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wahogui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-01 02:54:25
你可以合成两条互补的引物，列如  
     5-AAATTTGCCCCYYY-3
3-XXXTTTAAACGGGG-5

X，y代表酶切缺口，如果是平末端连接那么就不要x，y碱基了，两链条引物合成以后直接通过退火皆可以变成双连DNA了，估算好浓度就可以用来做连接实验了。
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5楼2013-08-31 10:22:51
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