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wenzi6337

木虫 (著名写手)

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[求助] 求助关于his标签的ip 已有2人参与

我准备用表达的his融合蛋白钓取细胞裂解液中与之相互作用的蛋白，
设想是先将大肠杆菌中表达的蛋白用his-band纯化，
再用纯化的蛋白和细胞裂解液孵育，
用his的单抗挂孵育获得的复合体蛋白，
再用蛋白A挂his的抗体（含his抗体，his融合蛋白和与之相互作用蛋白），
最后用银染分离蛋白，
打质谱鉴定与我的his融合蛋白相互作用的蛋白。
请问各位虫友我的设计是否可行？
谢谢！

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1楼 2015-01-17 10:19:30

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ptttmt

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-17 12:02:21
wenzi6337: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-01-17 13:40:43

搞这么麻烦，搭桥搭这么多，为啥不尝试用Ni-NTA-琼脂糖bead结合大肠杆菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗琼脂糖bead，将bead加入到细胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脱buffer，加loading buffer制样跑PAGE？

全程在一个EP管中操作，多简单啊。

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2楼2015-01-17 11:22:15

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wenzi6337

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 11:22:15
搞这么麻烦，搭桥搭这么多，为啥不尝试用Ni-NTA-琼脂糖bead结合大肠杆菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗琼脂糖bead，将bead加入到细胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脱 ...

这个Ni-NTA-琼脂糖bead 和镍柱填料的resin是一样的吗？

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3楼2015-01-17 13:41:49

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