应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助关于his标签的ip
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2146  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wenzi6337

木虫 (著名写手)

[求助] 求助关于his标签的ip 已有2人参与

我准备用表达的his融合蛋白钓取细胞裂解液中与之相互作用的蛋白，
设想是先将大肠杆菌中表达的蛋白用his-band纯化，
再用纯化的蛋白和细胞裂解液孵育，
用his的单抗挂孵育获得的复合体蛋白，
再用蛋白A挂his的抗体（含his抗体，his融合蛋白和与之相互作用蛋白），
最后用银染分离蛋白，
打质谱鉴定与我的his融合蛋白相互作用的蛋白。
请问各位虫友我的设计是否可行？
谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-17 10:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

质谱做蛋白组学不能用银染
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2015-01-23 11:42:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-17 12:02:21
wenzi6337: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-01-17 13:40:43
搞这么麻烦，搭桥搭这么多，为啥不尝试用Ni-NTA-琼脂糖bead结合大肠杆菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗琼脂糖bead，将bead加入到细胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脱buffer，加loading buffer制样跑PAGE？

全程在一个EP管中操作，多简单啊。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2015-01-17 11:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenzi6337

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 11:22:15
搞这么麻烦，搭桥搭这么多，为啥不尝试用Ni-NTA-琼脂糖bead结合大肠杆菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗琼脂糖bead，将bead加入到细胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脱 ...

这个Ni-NTA-琼脂糖bead 和镍柱填料的resin是一样的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-17 13:41:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wenzi6337: 金币+5, ★有帮助, 嗯，我现在有novagen的His Bind Resin，可以先做一下 2015-01-22 14:52:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by wenzi6337 at 2015-01-17 13:41:49
这个Ni-NTA-琼脂糖bead 和镍柱填料的resin是一样的吗？...

不同公司的Ni柱填料可能基质会不一样，不过木有关系，做这个试验要做好对照，找个其他无关的his蛋白作对照，用resin螯合，其余跟样品是一样一样的操作
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-17 14:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +5 PolarBear11 2026-03-26 5/250 2026-03-26 23:59 by 运气yunqi
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +3 nnnnnnn5 2026-03-25 3/150 2026-03-26 22:38 by 不吃魚的貓
[考研] 284求调剂 +9 junqihahaha 2026-03-26 10/500 2026-03-26 22:02 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 6/300 2026-03-26 20:37 by fmesaito
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +3 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:35 by 求调剂zz
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:16 by JourneyLucky
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +17 tcxiaoxx 2026-03-20 19/950 2026-03-26 16:04 by 不吃魚的貓
[考研] 291 求调剂 +7 化工2026届毕业� 2026-03-21 8/400 2026-03-26 11:25 by AlenQIN.
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭