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wenzi6337木虫 (著名写手)
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我准备用表达的his融合蛋白钓取细胞裂解液中与之相互作用的蛋白， 设想是先将大肠杆菌中表达的蛋白用his-band纯化， 再用纯化的蛋白和细胞裂解液孵育， 用his的单抗挂孵育获得的复合体蛋白， 再用蛋白A挂his的抗体（含his抗体，his融合蛋白和与之相互作用蛋白）， 最后用银染分离蛋白， 打质谱鉴定与我的his融合蛋白相互作用的蛋白。 请问各位虫友我的设计是否可行？ 谢谢！ |
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wenzi6337
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7楼2015-01-22 14:54:51
【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-17 12:02:21
wenzi6337: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-01-17 13:40:43
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搞这么麻烦，搭桥搭这么多，为啥不尝试用Ni-NTA-琼脂糖bead结合大肠杆菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗琼脂糖bead，将bead加入到细胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脱buffer，加loading buffer制样跑PAGE？ 全程在一个EP管中操作，多简单啊。 |
2楼2015-01-17 11:22:15
wenzi6337
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3楼2015-01-17 13:41:49
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