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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 菌摇不起来是怎么回事 已有5人参与

我将成功构建的重组质粒转入BL21中,挑取单克隆摇菌,amp抗性的,结果摇的非常缓慢,37度16小时OD值也才达到0.7左右。将这个菌液抽取50ul重新摇菌8h结果没有摇出来,液体澄清。不知道是怎么回事?LB和amp应该是没有问题的,因为我摇了一个对照,对照菌生长良好。请大家帮帮忙
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1 2015-01-16 11:37:12
很正常啊,单菌落摇菌很正常,我们一般都摇菌要十几个,不出很正常,一般是每条上或者没摇起来,时间也挺长的。
2楼2015-01-16 11:06:27
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Gin—红与黑

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇3个平行吧~等时间长一点。我以前也有时间太短摇不出来的,
3楼2015-01-16 11:49:09
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主菌液PCR看看,能不能P出来,或不加AMP摇菌看看,可能没有重组子。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-01-16 15:55:17
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好是能多挑几个菌落。amp少加点试试看吧,有的重组子抗性弱。还有就是把长的那个做个菌落PCR看看是不是。
最喜欢的就是最好的。
5楼2015-01-16 16:47:41
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1009238055

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉这种情况是重组DNA丢失哦,因为对照摇起来了的,做个PCR检测一下吧。
6楼2015-01-16 16:53:44
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