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anona

铜虫 (初入文坛)

[求助] DNA OD值260/230<1 已有2人参与

师兄四个月之前提取的肠道微生物DNA,保存在负20度,浓度在50~300,OD260/280在2~2.2,,OD260/230在2~3之间,现在我准备做荧光定量PCR,检测DNA260/230都<1,260/280在2.1~2.3之间,求助,实验还能做吗?有什么补救的方法吗?小白求指教。
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:37:32
没事,接着做。260/280在2.1~2.3之间这个正常就行。
A260/A280和A260/A230  是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。  当 0.5%BSA蛋白质污染时,蛋白污染会导致260和280的数值都下降,其净结果是260/280比值下降,但260/280的比值变化并不显著,正如分子克隆3所说。但蛋白残留会导致230的数值显著上升,显著影响260/230的比值。也就是说,如果RNA样品的260/280=1.7,260 /230=0.5,那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留,而是蛋白残留
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-01-09 09:19:57
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

仅仅做qRT可以试试,如果做高通量测序,那就最好重提了。
3楼2015-01-12 19:58:46
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anona

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-09 09:19:57
没事,接着做。260/280在2.1~2.3之间这个正常就行。
A260/A280和A260/A230  是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或 ...

今天试了一下,还可以,谢谢,
4楼2015-01-12 22:11:27
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anona

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 19:58:46
仅仅做qRT可以试试,如果做高通量测序,那就最好重提了。

谢谢
5楼2015-01-12 22:11:35
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