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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)

[求助] 5'RACE一直到不了头怎么办 已有1人参与

想测定一种病毒的不同isolate的全基因组序列,基本上都已经有了,就剩5'端还有十几个核苷酸,用5'RACE做了好几个月了,总是差这么一点,clotech,takara等试剂盒都试过,不知道咋整了,有没有其他方法可以尝试?takara的genome walking试剂盒是否可以尝试一下?3xs
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-01-05 15:32:47
entomology557: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-05 16:06:45
genome walking不是干这个用的。如果你是用tdt加尾的方法做的,理论上讲不存在到不了头的情况,但是有一种可能就是你的cdna 3'不全,那你怎麽也得不到mrna5'完全的序列

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-01-05 10:45:27
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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-05 10:45:27
genome walking不是干这个用的。如果你是用tdt加尾的方法做的,理论上讲不存在到不了头的情况,但是有一种可能就是你的cdna 3'不全,那你怎麽也得不到mrna5'完全的序列
...

确实在怀疑是否cdna的质量不是太好,因为样品在冰箱里放了有几个月了,真的不行只能明年再来了
生物进化基本常识:一定范围内,选择压力越大,要么进化的越快来适应这种压力,或者直接被淘汰。
3楼2015-01-05 16:06:22
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