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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5'RACE一直到不了头怎么办
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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)

[求助] 5'RACE一直到不了头怎么办 已有1人参与

想测定一种病毒的不同isolate的全基因组序列，基本上都已经有了，就剩5'端还有十几个核苷酸，用5'RACE做了好几个月了，总是差这么一点，clotech，takara等试剂盒都试过，不知道咋整了，有没有其他方法可以尝试？takara的genome walking试剂盒是否可以尝试一下？3xs
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1楼 2015-01-05 09:27:39
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-01-05 15:32:47
entomology557: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-05 16:06:45
genome walking不是干这个用的。如果你是用tdt加尾的方法做的，理论上讲不存在到不了头的情况，但是有一种可能就是你的cdna 3'不全，那你怎麽也得不到mrna5'完全的序列

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-01-05 10:45:27
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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-05 10:45:27
genome walking不是干这个用的。如果你是用tdt加尾的方法做的，理论上讲不存在到不了头的情况，但是有一种可能就是你的cdna 3'不全，那你怎麽也得不到mrna5'完全的序列
...

确实在怀疑是否cdna的质量不是太好，因为样品在冰箱里放了有几个月了，真的不行只能明年再来了
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生物进化基本常识：一定范围内，选择压力越大，要么进化的越快来适应这种压力，或者直接被淘汰。
3楼2015-01-05 16:06:22
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