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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 染色体步移技术和5'RACE的区别
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zhghlj

新虫 (小有名气)

[求助] 染色体步移技术和5'RACE的区别 已有2人参与

大家好！
我目前已知一个基因的ORF序列，想要获得它的启动子区序列或者是上游序列，请问是使用5'端染色体步移技术还是5'RACE呢？
我不是很明白5'RACE的原理，我看一篇文章想要分析一个基因的转录起始位点和启动子序列时，使用的是RACE方法，先要提取RNA，然后使用试剂盒扩增。请问和我直接进行5'端染色体步移有何区别呢？
谢谢大家！
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1楼 2014-08-06 18:49:31
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-06 19:40:49
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-12 07:24:38
一个是cdna为模板，一个是dna为模板，适用范围不同

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zhghlj
2楼2014-08-06 19:32:08
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zhghlj

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-06 19:32:08
一个是cdna为模板，一个是dna为模板，适用范围不同

那请问如果我想要准确得知基因的上游启动子区序列，用哪一种方法比较好呢？
谢谢！
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3楼2014-08-07 09:35:09
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niil

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-12 07:25:06
扩启动子序列，要用染色体步移咯，启动子序列在cDNA中极其少见，不能用RACE。
不过要确切知道启动子位置，还是需要做5'RACE的，5‘RACE成功了，拿5'RACE结果与染色体步移得到的基因组序列比对一下，就找到了转录起始位点，在基因组中转录起始位点上游就是启动子区域。
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Stop fighting,let it flow.
4楼2014-08-07 16:00:14
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zhghlj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by niil at 2014-08-07 16:00:14
扩启动子序列，要用染色体步移咯，启动子序列在cDNA中极其少见，不能用RACE。
不过要确切知道启动子位置，还是需要做5'RACE的，5‘RACE成功了，拿5'RACE结果与染色体步移得到的基因组序列比对一下，就找到了转录起 ...

您好！
我想进行细菌的启动子分析，可是无从下手，您可以给一些意见吗？万分感谢！
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5楼2014-08-11 20:37:01
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匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
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6楼2014-08-11 22:24:40
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

组成型启动子可以用pEGFP-1载体

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7楼2014-08-12 07:11:51
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zhghlj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sevenZ at 2014-08-11 22:24:40
步移，但是步移有时候需要点运气

是呀  有时候一周也步移不出来结果 呜呜
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8楼2014-08-12 09:15:28
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niil

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhghlj at 2014-08-11 20:37:01
您好！
我想进行细菌的启动子分析，可是无从下手，您可以给一些意见吗？万分感谢！...

操纵子是细菌基因表达的主要组织形式，每个操纵子含有一个启动子，能够驱动一系列功能相关的基因的表达。
如果要麻烦点的话，你可以构建一个细菌基因组文库，通过探针或者PCR筛选，找到含有目标ORF的相关单克隆进行测序。
也有直接针对某基因进行walking的方法，如TAIL PCR。TAKARA有一个试剂盒叫Genome Walking Kit，不知道其他公司有没有相关的试剂盒。PCR用的酶最好是保真度较高的酶。
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Stop fighting,let it flow.
9楼2014-08-12 15:42:11
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zhghlj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by niil at 2014-08-12 15:42:11
操纵子是细菌基因表达的主要组织形式，每个操纵子含有一个启动子，能够驱动一系列功能相关的基因的表达。
如果要麻烦点的话，你可以构建一个细菌基因组文库，通过探针或者PCR筛选，找到含有目标ORF的相关单克隆进 ...

你好~
我就在用Takara的试剂盒进行步移试验 感觉有的时候步移很靠运气
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10楼2014-08-13 16:08:33
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