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zhghlj

新虫 (小有名气)

[求助] 染色体步移技术和5'RACE的区别 已有2人参与

大家好!
我目前已知一个基因的ORF序列,想要获得它的启动子区序列或者是上游序列,请问是使用5'端染色体步移技术还是5'RACE呢?
我不是很明白5'RACE的原理,我看一篇文章想要分析一个基因的转录起始位点和启动子序列时,使用的是RACE方法,先要提取RNA,然后使用试剂盒扩增。请问和我直接进行5'端染色体步移有何区别呢?
谢谢大家!
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niil

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhghlj at 2014-08-11 20:37:01
您好!
我想进行细菌的启动子分析,可是无从下手,您可以给一些意见吗?万分感谢!...

操纵子是细菌基因表达的主要组织形式,每个操纵子含有一个启动子,能够驱动一系列功能相关的基因的表达。
如果要麻烦点的话,你可以构建一个细菌基因组文库,通过探针或者PCR筛选,找到含有目标ORF的相关单克隆进行测序。
也有直接针对某基因进行walking的方法,如TAIL PCR。TAKARA有一个试剂盒叫Genome Walking Kit,不知道其他公司有没有相关的试剂盒。PCR用的酶最好是保真度较高的酶。
Stop fighting,let it flow.
9楼2014-08-12 15:42:11
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-06 19:40:49
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-12 07:24:38
一个是cdna为模板,一个是dna为模板,适用范围不同

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-08-06 19:32:08
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zhghlj

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-06 19:32:08
一个是cdna为模板,一个是dna为模板,适用范围不同

那请问如果我想要准确得知基因的上游启动子区序列,用哪一种方法比较好呢?
谢谢!
3楼2014-08-07 09:35:09
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niil

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-12 07:25:06
扩启动子序列,要用染色体步移咯,启动子序列在cDNA中极其少见,不能用RACE。
不过要确切知道启动子位置,还是需要做5'RACE的,5‘RACE成功了,拿5'RACE结果与染色体步移得到的基因组序列比对一下,就找到了转录起始位点,在基因组中转录起始位点上游就是启动子区域。
Stop fighting,let it flow.
4楼2014-08-07 16:00:14
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