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fanmiaozhen

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2125440
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专业: 环境微生物学

[求助] SSR-PAGE银染问题已有4人参与

为什么我的银染那么拖，不清晰？
我的染色步骤是这样的（200v电压）：
固定：10分钟
染色：10分钟，水洗两次，每次1分钟
显色：直至出带；固定液终止显色
固定液：乙醇50ml，乙酸2.5ml，超纯水定容至500ml；
染色液：乙醇50ml，乙酸2.5ml，1g硝酸银，超纯水定容至500ml；
显色液：氢氧化钠 15g，甲醛0.5ml，超纯水500ml。

IMG_20141224_141555.jpg

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1楼 2014-12-27 09:46:33

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王平阳

金虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

首先，上样量太大，银染是很灵敏的；
然后，固定时间太短，最好半个小时以上；
第三，显色时间过长，酌情减短。
我也是做SSR的，一般是用普通PCR和琼脂糖电泳，也做过PAGE电泳，不过后面是用EB染的，虽然没找到多态性效果还可以（EB液中泡半个小时，清水漂洗10分钟，再在紫外光下拍照查看），还有就是可以用HRM技术，可以检测到SNP，灵敏度很高，最终极办法就是测序法，这些方法检测灵敏度是逐渐增加的。
些许建议，仅供参考！