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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » SSR-PAGE银染问题
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fanmiaozhen

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR-PAGE银染问题 已有4人参与

为什么我的银染那么拖，不清晰？
我的染色步骤是这样的（200v电压）：
固定：10分钟
染色：10分钟，水洗两次，每次1分钟
显色：直至出带；固定液终止显色
固定液：乙醇50ml，乙酸2.5ml，超纯水定容至500ml；
染色液：乙醇50ml，乙酸2.5ml，1g硝酸银，超纯水定容至500ml；
显色液：氢氧化钠 15g，甲醛0.5ml，超纯水500ml。

SSR-PAGE银染问题
IMG_20141224_141555.jpg
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1楼 2014-12-27 09:46:33
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-28 23:04:06
蛋白样品确定没问题吗？可以试着降低最后一步显色液的浓度，按比例降低。或者减少上样量，降低非特异条带量

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Nevergiveup
2楼2014-12-27 12:10:08
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

上面写错了，是染色液，不是显色液，不好意思

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3楼2014-12-27 12:11:08
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fanmiaozhen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by woshiyeda at 2014-12-27 12:10:08
蛋白样品确定没问题吗？可以试着降低最后一步显色液的浓度，按比例降低。或者减少上样量，降低非特异条带量

做的不是蛋白，是DNA染色
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4楼2014-12-27 15:18:42
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yanmou

木虫 (正式写手)

cc

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-28 23:04:45
mark看着就模糊，胶做的不好，配好的胶不匀，看看你的电极液，用了好多次吧。你点样的时候是不是把胶戳破了。扩增的条带模糊，你是陪体系配的不好，DNA浓度过高？或者扩增问题。也可能DNA降解。

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hurry up
5楼2014-12-27 16:28:16
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fanmiaozhen at 2014-12-27 15:18:42
做的不是蛋白，是DNA染色...

胶！检查一下胶配的怎么样

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6楼2014-12-27 17:27:28
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小苹果102810

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同学，你好，我最近要做dna的ssr鉴定，纯新手，麻烦同学给我份方法参考下可好？谢谢！

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7楼2014-12-29 01:38:59
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，上样量太大，银染是很灵敏的；
然后，固定时间太短，最好半个小时以上；
第三，显色时间过长，酌情减短。
我也是做SSR的，一般是用普通PCR和琼脂糖电泳，也做过PAGE电泳，不过后面是用EB染的，虽然没找到多态性效果还可以（EB液中泡半个小时，清水漂洗10分钟，再在紫外光下拍照查看），还有就是可以用HRM技术，可以检测到SNP，灵敏度很高，最终极办法就是测序法，这些方法检测灵敏度是逐渐增加的。
些许建议，仅供参考！
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没有做不到，只有想不到！
8楼2014-12-29 10:48:16
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灰灰小哥

新虫 (小有名气)
我们用的大板胶跑的，对小胶不大清楚
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9楼2014-12-29 16:33:56
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nvhuang1

新虫 (初入文坛)
我现在就在做SSR银染，个人觉得首先是电压太高，我的是120v。
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10楼2015-03-23 15:38:10
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