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fanmiaozhen

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR-PAGE银染问题 已有4人参与

为什么我的银染那么拖,不清晰?
我的染色步骤是这样的(200v电压):
固定:10分钟
染色:10分钟,水洗两次,每次1分钟
显色:直至出带;固定液终止显色
固定液:乙醇50ml,乙酸2.5ml,超纯水定容至500ml;
染色液:乙醇50ml,乙酸2.5ml,1g硝酸银,超纯水定容至500ml;
显色液:氢氧化钠 15g,甲醛0.5ml,超纯水500ml。

SSR-PAGE银染问题
IMG_20141224_141555.jpg
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-28 23:04:06
蛋白样品确定没问题吗?可以试着降低最后一步显色液的浓度,按比例降低。或者减少上样量,降低非特异条带量

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Nevergiveup
2楼2014-12-27 12:10:08
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

上面写错了,是染色液,不是显色液,不好意思

[ 发自小木虫客户端 ]
Nevergiveup
3楼2014-12-27 12:11:08
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fanmiaozhen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woshiyeda at 2014-12-27 12:10:08
蛋白样品确定没问题吗?可以试着降低最后一步显色液的浓度,按比例降低。或者减少上样量,降低非特异条带量

做的不是蛋白,是DNA染色
4楼2014-12-27 15:18:42
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yanmou

木虫 (正式写手)

cc

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-28 23:04:45
mark看着就模糊,胶做的不好,配好的胶不匀,看看你的电极液,用了好多次吧。你点样的时候是不是把胶戳破了。扩增的条带模糊,你是陪体系配的不好,DNA浓度过高?或者扩增问题。也可能DNA降解。

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hurry up
5楼2014-12-27 16:28:16
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fanmiaozhen at 2014-12-27 15:18:42
做的不是蛋白,是DNA染色...

胶!检查一下胶配的怎么样

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Nevergiveup
6楼2014-12-27 17:27:28
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小苹果102810

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同学,你好,我最近要做dna的ssr鉴定,纯新手,麻烦同学给我份方法参考下可好?谢谢!

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7楼2014-12-29 01:38:59
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,上样量太大,银染是很灵敏的;
然后,固定时间太短,最好半个小时以上;
第三,显色时间过长,酌情减短。
我也是做SSR的,一般是用普通PCR和琼脂糖电泳,也做过PAGE电泳,不过后面是用EB染的,虽然没找到多态性效果还可以(EB液中泡半个小时,清水漂洗10分钟,再在紫外光下拍照查看),还有就是可以用HRM技术,可以检测到SNP,灵敏度很高,最终极办法就是测序法,这些方法检测灵敏度是逐渐增加的。
些许建议,仅供参考!
没有做不到,只有想不到!
8楼2014-12-29 10:48:16
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灰灰小哥

新虫 (小有名气)

我们用的大板胶跑的,对小胶不大清楚
9楼2014-12-29 16:33:56
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nvhuang1

新虫 (初入文坛)

我现在就在做SSR银染,个人觉得首先是电压太高,我的是120v。
10楼2015-03-23 15:38:10
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