应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】银染法的具体步骤
141/2返回列表12下一页
查看: 3497  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

p2011

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】银染法的具体步骤 已有10人参与

求核酸PCR银染法的具体步骤..越详细越好，谢谢！！
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xhjggl

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-12 10:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-12 21:43:51
银染法还是比较麻烦的
你要是有《分子克隆实验指南》的话可以看那书的
那书上的方法
就很好用
我们常用的，一点问题也没有
很敏感，分辨率也很高
你是没书的话
估计得我有空才能给您讲讲了
赞一下(2人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2011-04-12 11:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

p2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-12 11:59:36:
银染法还是比较麻烦的
你要是有《分子克隆实验指南》的话可以看那书的
那书上的方法
就很好用
我们常用的，一点问题也没有
很敏感，分辨率也很高
你是没书的话
估计得我有空才能给您讲讲了

真本书我有，但是我还想问一下你们染色是完全按照这本书上来的还是有一些条件优化？你们染色一次大概要多久？我原来用EB染色，但是胶的整体清晰度很差想要换银染试试，但是具体的实验条件不知道用不用摸索..
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-12 15:00:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-04-13 19:41:01
引用回帖:
Originally posted by p2011 at 2011-04-12 15:00:22:
真本书我有，但是我还想问一下你们染色是完全按照这本书上来的还是有一些条件优化？你们染色一次大概要多久？我原来用EB染色，但是胶的整体清晰度很差想要换银染试试，但是具体的实验条件不知道用不用摸索..

基本没有优化
就是按照它的步骤往下做
配液什么的配准了
显色的时候盯住了
仪但效果出来了就马上终止
跑的SNP都还很好的
没问题
一般染一次得一个下午的时间吧
赞一下(2人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2011-04-12 15:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

p2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-12 15:46:21:
基本没有优化
就是按照它的步骤往下做
配液什么的配准了
显色的时候盯住了
仪但效果出来了就马上终止
跑的SNP都还很好的
没问题
一般染一次得一个下午的时间吧

哦，知道了，谢谢！！
回复此楼
5楼2011-04-12 16:16:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+5): 欢迎回归^_^ 2011-04-13 19:41:39
引用回帖:
Originally posted by p2011 at 2011-04-12 16:16:38:
哦，知道了，谢谢！！

Silver staining protocol
Compatible with mass spectrometry, excellent signal-to-noise ratio
(Ref: Protana website http://www.protana.com/services/protocols/default.asp)
Buffers
Fixer: 50% MeOH, 12% HAc, 0.05% formalin (35% Formaldehyde) 200 ml
100 ml MeOH (99.8%)
24 ml HAc (100%)
100 μl formalin (35% Formaldehyd)
76 ml H2O (Milli-Q)
Wash: 35% EtOH (96%) 200 ml
73 ml EtOH
127 ml H2O
Sensitizing: 0.02% Na2S2O3 200 ml
0.04 g Na2S2O3
200 ml H2O
Silver nitrate:0.2% AgNO3, 0.076% formalin (35% Formaldehyde) 200 ml
0.4 g AgNO3
152 μl formalin (35% Formaldehyde)
200 ml H2O
Developer: 6% Na2CO3, 0.05% formalin (35% Formaldehyde),
0.0004% Na2S2O3 400 ml
24 g Na2CO3
200 μl formalin (35% Formaldehyde)
8 ml 0.02% Na2S2O3
392 ml H2O
Stop solution:50% MeOH, 12% HAc 200 ml
100 ml MeOH
24 ml HAc
76 ml H2O
Procedure
1. Fix gel: 50% MeOH, 12% Hac, 0.05% formalin, 2 hrs or overnight
2. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.
3. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.
4. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.
5. Sensitize gel: 0.02% Na2S2O3 for 2 mins.
6. Wash gel: H2O for 5 mins.
7. Wash gel: H2O for 5 mins.
8. Wash gel: H2O for 5 mins.
9. Stain gel: 0.2% AgNO3, 0.076% formalin for 20 mins.
10. Wash gel: H2O for 1 min.
11. Wash gel: H2O for 1 min.
12. Develop gel: 6% Na2CO3, 0.05% formalin, 0.0004% Na2S2O3
13. Stop staining: 50% MeOH, 12% HAc for 5 mins.
14. Leave the gel at 4ºC in: 1% Hac
Remark: For coomassie blue stained gel, wash O/N in water, then start from step 5.
赞一下(2人) 回复此楼
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
6楼2011-04-13 10:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reasonspare

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by p2011 at 2011-04-12 10:00:30:
求核酸PCR银染法的具体步骤..越详细越好，谢谢！！

可是我的是核酸步骤同蛋白的银染步骤相同吗？？谢谢..


步骤不是完全一致的，
具体如下


   1. Separate plates while keeping the gel attached to short glass.

      
   2. Fix the gel: Place gel in tray, cover with cold fix/stop solution and agitate well for 20 minutes. Gel may be stored in fix/stop solution overnight. Save fix/stop solution and place back in freezer.

      
   3. Wash the gel: Rinse the gel 3 times for 2-3 min. each in ddH2O using agitation. Lift gel from solution and allow to drain 10-20 seconds.

      
   4. Stain the gel: Transfer the gel to staining solution and agitate well for 30 minutes.

      
   5. Pour 1L of the developing solution into a tray. Transfer staining solution to beaker. Rinse tray and fill with ddH2O.

      
   6. Rinse gel for 5-10 seconds ONLY. Transfer to developing solution.

      
   7. Agitate in developing solution until bands begin to appear. Transfer gel to remaining chilled developing solution for 2-3 minutes.

      
   8. Fix the gel: add 1L of Fix/stop solution directly to developing solution and agitate for 2-3 minutes

      
   9. Rinse gel twice for two minutes each in ddH2O.

      
  10. Dry gel on glass



Fix/stop solution Staining solution

200ml of glacial acidic acid 2g (1 packet) of silver nitrate (AgNO3)

1,800ml ultrapure water 3ml (1 vial) of 37% Formaldehyde

Freeze for approx. 3 hours 2L ultrapure water



Developing solution

60g (1 packet) Sodium Carbonate (Na2CO3)

2L ultrapure water

**chill to 10oC. I place sol. In freezer for approx 4 hours and stir to break up ice prior to use.

Immediately before use add

3ml (1 vial) of 37% Formaldehyde

400m l aliquot Sodium Thiosulfate (discard remaining)
赞一下(1人) 回复此楼
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
7楼2011-04-16 10:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卧龙ac
8楼2012-08-02 20:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
silicare: 金币-5, 应助指数-2, 屏蔽内容 2012-08-31 18:30:36
本帖内容被屏蔽
9楼2012-08-06 13:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡蓝色的天空

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by jhu132llh at 2011-04-12 11:59:36
银染法还是比较麻烦的
你要是有《分子克隆实验指南》的话可以看那书的
那书上的方法
就很好用
我们常用的，一点问题也没有
很敏感，分辨率也很高
你是没书的话
估计得我有空才能给您讲讲了

我的书是中文版的，可是貌似没有看到银染这一说啊
赞一下 回复此楼
everything is possible
10楼2013-12-01 17:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 p2011 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂（有希望2吗？） +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，药学 +3 归零lbm 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:21 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭