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zhymaomao

新虫 (初入文坛)

[求助] SRB法具体操作步骤及所用液体的配制

急求SRB法操作步骤
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1楼 2012-03-07 16:31:29
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豆哥

主管区长 (职业作家)

制粒能手

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius(金币+1): 说得很详细，谢谢。 2012-03-08 08:55:22
药物作用后，去上清培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1h后，用蒸馏水反复洗涤，空气中自然干燥。干燥后加入由冰醋酸配制的SRB（sigma）溶液100μl/孔，室温中染色15min，去上清液，用1％醋酸反复洗涤，空气中自干。最后加入150μl/孔Tris溶液，用酶标仪测各孔的A值。

溶液的配制可以去网上查一下。
SRB溶液最好买SIGMA的。
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边学边问，才有学问。
2楼2012-03-08 08:46:31
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zhymaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 豆哥 at 2012-03-08 08:46:31:
药物作用后，去上清培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1h后，用蒸馏水反复洗涤，空气中自然干燥。干燥后加入由冰醋酸配制的SRB（sigma）溶液100μl/孔，室温中染色15min，去上清液，用1％醋酸反复洗涤，空气中 ...

嗯嗯，好的，非常感谢
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3楼2012-03-12 12:06:24
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yyjy84102

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

SRB法步骤差不多 但是各种试剂的作用时间是需要你自己摸索的（为了实验严谨，最好自己摸索下） 我说下我们实验室的条件吧：药物作用后，取出板，弃去培养液，加入10％冷TCA 200μl固定细胞，4℃放置40min后，用蒸馏水冲洗3遍（注意不要直接冲洗细胞），空气中自然干燥（或37℃培养箱中烘干，但不能太干）。干燥后加入由冰醋酸配制的SRB（sigma）溶液100μl/孔，37℃培养箱中染色30min，去上清液，用蒸馏水冲洗3遍，空气中自干。最后加入150μl/孔Tris溶液，用酶标仪测各孔的A值。
希望对你有帮助吧~~~
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4楼2012-05-11 22:20:03
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

推荐阅读Sulforhodamine B Assay and Chemosensitivity
From: Methods in Molecular Medicine, vol. 110: Chemosensitivity: Vol. 1: In Vitro Assays
Edited by: R. D. Blumenthal © Humana Press Inc., Totowa, NJ
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5楼2012-05-30 15:08:51
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may451

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 豆哥 at 2012-03-08 08:46:31
药物作用后，去上清培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1h后，用蒸馏水反复洗涤，空气中自然干燥。干燥后加入由冰醋酸配制的SRB（sigma）溶液100μl/孔，室温中染色15min，去上清液，用1％醋酸反复洗涤，空气中自 ...

10%TCA就可以？我们贴壁细胞50%TCA，悬浮细胞80%，好大。。。
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送给自己一个微笑~
6楼2013-03-30 20:53:03
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may451

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyjy84102 at 2012-05-11 22:20:03
SRB法步骤差不多 但是各种试剂的作用时间是需要你自己摸索的（为了实验严谨，最好自己摸索下） 我说下我们实验室的条件吧：药物作用后，取出板，弃去培养液，加入10％冷TCA 200μl固定细胞，4℃放置40min后，用蒸馏 ...

SRB（sigma）溶液100μl/孔啊？我只加了25ul，室温染色1h，去上清，用1%醋酸洗的。用蒸馏水洗也可以吗？25ul少吗？100ul好多啊，3遍能洗到发白吗。。。？谢谢！！
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送给自己一个微笑~
7楼2013-03-30 20:57:48
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