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xiaoniu_e

木虫 (正式写手)

[求助] 请教液体培养基试管连续稀释法的操作

测试药物的抗菌活性,用液体培养基试管连续稀释法测MIC。

每个试管中,接种菌液量多少合适?
我在网上搜,涉及到具体操作的不多,有一个有操作的写的是“细菌检测培养基通常采用营养肉汤培养,将约为104-105个/mL浓度的接种菌液分装13个试管中”。
104-105个/mL是什么意思?(我是做药物合成的,对抗菌测试是外行,不太懂,菌液浓度的表示方法是这样的吗?)
不同的菌株,都用这个浓度吗?还是有区别?我打算做金葡和大肠杆菌。

这种方法有没有什么标准操作规程之类的呢?我在网上和文献里没检索到,对这个领域不熟悉,可能检索不到位吧。

希望专业人士赐教。

附一个我搜到的实验操作方法:

具体操作是:细菌检测培养基通常采用营养肉汤培养,将约为104-105个/mL浓度的接种菌液分装13个试管中,第一只试管中加入一定量的抗菌剂,并做2倍连续稀释至第12只试管,第13只试管作为生长对照,放置在37。C培养16-24hr,观察结果,无菌增殖的最高稀释管的、抗菌浓度,为最低抑菌浓度(MIC)。

试验观察一般要在12-18 时进行,如时间过长,轻度抑制的细菌可能会开始繁殖,另一 方面一些抗菌剂因时间过长作用减弱,受抑制的细菌会再次繁殖。

[ Last edited by xiaoniu_e on 2011-11-1 at 22:49 ]
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-02 08:09:21
xiaoniu_e(金币+5): 多谢指点! 2011-11-02 11:50:16
104-105个/mL是指,每ml菌液中微生物(在此指你所测细菌)个数 ,此个数可以通过多种方法来测定,如血球计数板、平板计数等。经典表示方法应该是cfu/ml。
2楼2011-11-01 22:54:25
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电容小菜虫

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-02 08:09:27
xiaoniu_e(金币+5): 多谢指点! 2011-11-02 11:51:14
以前做细菌实验,设备超简单,放大镜,试管,牛油。取母液一毫升到一管,稀释到十毫升,摇匀取一管一毫升到二管,继续稀释。。第七八管后取到培养皿,生物培养。。现在应该简单多了吧。。
美女的眼光都很低
3楼2011-11-01 23:16:41
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qinchunhong

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+4): good,看lz反馈,反馈的好可以向版主申请个epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金币+10): 很详细!谢谢! 再请教一下,含药的母液,是用什么配制呢?也是液体培养基? 2011-11-02 19:24:55
第一,你需要确定你的细菌溶液中含有的细菌数量,可以通过测OD值,平板计数法等来测定。
第二,每个试管中加入1~2m(如果这里加入是1ml,后面也都加入1ml)l液体培养基,编好序号为1-13.
第三,在编号1的试管中加入药液,这就根据你配制的母液和需要的浓度来加入,一般尽量是加入1~2ml的配置母液哈,然后1号管中吸取1~2ml的混合液体加入第2号试管中,依次逐个稀释至第11号管,12号管为阳性对照(不加药液,只加稀释好的菌液),13号管为阴性对照(只有培养基,其余什么都不加入)(加入你要做的浓度是256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25,那么这步加入药液后,液体中的药物浓度应该是512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5,是因为后面还有菌液将药液进行了2倍稀释)。
第四,加入1ml稀释好的菌液,放置培养箱中培养12-16h观察结果。
4楼2011-11-02 12:22:00
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羲和殇

木虫 (小有名气)


zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-04 08:39:33
楼主的意思是不是,13支加菌的试管中,第一支加一定浓度比如 a的药品溶液,2 — 12,分别加浓度2倍梯度稀释药品溶液,最后一只13号不加药品做空白对照,通过计算13号的生长情况,对比前面几支来决定药品的最低有效抗菌浓度。
如是是上面说的情况的话,其实细菌稀释到100cfu/ml纯粹是方便计数,菌浓度太低或太高都影响你实验结果的准确性,所以需要你事先吧菌稀释到这个100个/mL这个浓度......
苍天弃吾,吾宁成魔!!
5楼2011-11-04 00:18:40
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Liammo

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 电容小菜虫 at 2011-11-01 23:16:41
以前做细菌实验,设备超简单,放大镜,试管,牛油。取母液一毫升到一管,稀释到十毫升,摇匀取一管一毫升到二管,继续稀释。。第七八管后取到培养皿,生物培养。。现在应该简单多了吧。。

现在2021年了,菌落的梯度稀释还是用这种方法
6楼2021-04-19 16:12:56
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本帖内容被屏蔽

7楼2021-05-11 16:26:49
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